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小鼠血管生成素1(Ang-1)檢測試劑盒

本試劑盒采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附法，用于體外定量分析小鼠血清、血漿、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清中Angiopoietin-1的含量。預(yù)先包被的抗體和檢測相克隆抗體都是親和純化的Angiopoietin-1多克隆抗體。檢測相抗體經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠Angiopoietin-1呈正相關(guān)。

血管生成素-1(ANG-1)和血管生成素-2(ANG-2)是二個密切相關(guān)的Tie-2配體。具有酪氨酸受體激酶的活性。有球蛋白和EGF的同源區(qū)。Tie-2和其配體在胚胎血管生成和成熟血管的維持過程中起重要作用。

檢測指標(biāo)：Angiopoietin-1；ANG-1；ANG1；Angpt1
檢測范圍：156pg/ml～10000pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)
敏感性：＜10pg/ml

產(chǎn)品組成：

儲存條件：2-8℃（頻繁使用時），-20℃（長時間不用時）
有效期：6個月(4℃)；12個月（-20℃）

參考標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)：(取自某一批次質(zhì)檢數(shù)據(jù)，僅供參考，用戶需要自己建立標(biāo)準(zhǔn)曲線)

小鼠血管生成素1(Ang-1)檢測試劑盒原理:

問：請問標(biāo)曲是每次都要做嗎？

答：是的，每次實驗，孵育時間，洗板次數(shù)等等條件均不一樣，不同實驗的標(biāo)曲不能混用，做一次實驗需要做一次標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且用當(dāng)次，同一塊板上的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果去計算板內(nèi)樣品的濃度，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

問：做預(yù)實驗時每種要做幾個復(fù)孔呀？

答：預(yù)實驗視情況而定，如果整個板子孔數(shù)較為充足，建議兩個復(fù)孔，如不充足，單孔也可以。要盡量保證實驗過程中加樣準(zhǔn)確。

問：血清樣本少量溶血，顏色稍深，對結(jié)有影響嗎？

答：會有影響，建議取樣時需注意，避免溶血、脂血等樣本。如樣本條件受限，建議用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，減少基質(zhì)效應(yīng)影響。

問：試劑盒有推薦稀釋濃度還需要自己測嗎？

答：試劑盒一般會給出不同樣品的推薦稀釋比例，但是為大致范圍，還是根據(jù)自己的樣本情況，設(shè)計預(yù)實驗測量計算。

問：加完終止液之后測的幾次數(shù)據(jù)差別也蠻大？

答：加完終止液后，顯色反應(yīng)也不是永遠(yuǎn)停止，形成的黃色顏色會隨著時間延長繼續(xù)加深，建議在15 min內(nèi)讀數(shù)。

問：副孔差別比較大，是沒洗干凈嗎？

答：復(fù)孔值差異較大，主要原因應(yīng)考慮加樣是否準(zhǔn)確，洗板過程中是否有殘留以及是否有交叉污染。

問：配好的抗體沒用完如何保存，可保存多久？預(yù)實驗用了一個試劑盒里面的部分板子和試劑，剩下的板子和試劑還能繼續(xù)用于正式實驗嗎？

答：一般來講，配好的母液，可以在四度保存，多一個月左右。剩下的板子和試劑是可以繼續(xù)用于正式實驗的，間隔時間不要太長，一個月之內(nèi)均可，需注意試劑避免污染，板子保持干燥。

問：后顯示的OD值在多少之間屬于可用值，有要求嗎？

答：有的，建議標(biāo)準(zhǔn)曲線高濃度點的OD值在2.0左右較好，也可參考說明書標(biāo)曲的數(shù)據(jù)。

問：樣本總是在標(biāo)準(zhǔn)曲線之外，稀釋100倍也是，怎么辦？

答：在設(shè)置稀釋倍數(shù)之前，需要參考相關(guān)文獻，對于一些表達*的蛋白，確實會出現(xiàn)這種情況，建議繼續(xù)提高稀釋比例。

問：試劑盒推薦用450和540nm雙波長檢測，但條件有限可否換成450和620的雙波長？如何使用校準(zhǔn)波長？還有，用空白孔校準(zhǔn)可以么？

答：可以的，TMB底物顯色后，吸光峰值在450nm，另外的校準(zhǔn)波長是防止氣泡等雜質(zhì)造成的干擾設(shè)置，避開450左右50nm以上即可。兩次讀取的OD值，用OD450 - OD校準(zhǔn)波長即可。盡量還是建議有條件的選用雙波長校準(zhǔn)的方法，因為避免了不同孔的讀數(shù)影響，防止出現(xiàn)空白孔污染，導(dǎo)致讀數(shù)較高，無法校準(zhǔn)的情況。

問：ELISA可以檢測胞內(nèi)蛋白么？

答：可以的，選用支持組織勻漿的ELISA試劑盒即可，將組織樣品或細(xì)胞樣品進行裂解，提取胞內(nèi)蛋白后進行蛋白定量，保證每孔上樣總蛋白量一致即可。

問：ELISA試劑盒顯色液是雙組份的，有些其他品牌的是單組分的，使用單組分的有影響么？

答：HRP酶標(biāo)二抗的ELISA試劑盒，顯色底物一般為TMB，TMB不穩(wěn)定，曝光或污染氧化后會出現(xiàn)顯色反應(yīng)，導(dǎo)致實驗背景升高，或無法使用，所以愛必信的ELISA試劑盒將顯色液調(diào)整為雙組份，方便穩(wěn)定保存，僅在使用前混合，避免了TMB的不穩(wěn)定影響實驗結(jié)果。如您選用的試劑盒為單組分顯色液，在使用前檢測是否為無色透明，如果是正常的，對結(jié)果也沒有影響，可以放心使用。

問：整個過程需要避光嗎？避光需要避到什么程度呢？

答：ELISA實驗中，在酶標(biāo)抗體孵育，以及顯色底物孵育這兩步建議避光，其他步驟無需避光。避光可采用錫紙包裹，或?qū)⒄麄€ELISA板子放入暗盒或抽屜等無光處即可。