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詳細(xì)介紹
乙型肝炎病毒特異性檢測
HBsAgGi抗體 & HBsAgGi ELISA試劑盒
◆HBsAgGi HBs抗原的糖鏈異構(gòu)體
本產(chǎn)品是針對M-HBs的O型糖鏈修飾的PreS2的單克隆抗體，可特異性識(shí)別含有DNA的傳染性病毒顆粒。
關(guān)于乙肝肝炎病毒及HBsAgGi
乙型肝炎病毒（HBV）作為一個(gè)全球性的健康問題，是傳染性zui強(qiáng)的病毒之一。
HBV包膜蛋白由三種表面抗原S-、M-和L-HBs組成，它們由含有PreS1、PreS2和S-結(jié)構(gòu)域的HBsAg基因產(chǎn)生1。 HBsAg被 N-聚糖和 O-聚糖高度糖基化2,3。全聚糖結(jié)構(gòu)分析顯示，PreS2結(jié)構(gòu)域中，只有在M-HBs上含有基因型C (gC) 中所包含的高度保守的O-糖基化位點(diǎn)，而L-HBs上卻沒有4,5。
HBsAgGi，是能與HBsAg的糖鏈異構(gòu)體相結(jié)合的重組單抗，其使用含有O型糖鏈的PreS2糖肽制備所得。與傳統(tǒng)的識(shí)別全部病毒顆粒的HBsAg檢測相比，HBsAgGi抗體可以特異性識(shí)別傳染性HBV顆粒（DNA病毒粒子）。
產(chǎn)品信息
HBsAgGi Recombinant mouse IgG1, 50μg
產(chǎn)品編號(hào) | 635-54381 |
對應(yīng)基因分型 | Genotype C |
同種型（isotype） | 小鼠IgG1 |
輕鏈 | Kappa(κ) 型 |
包裝 | 50 μg |
用途 | 1.WB 2.HBV顆粒的免疫沉淀/分離 3.ELISA 4.HBV感染抑制測定 5.免疫組化 |
保存方法 | 短期請保存于4℃，長期請保存于-20℃，避免凍融。 |
HBsAgGi可特異性識(shí)別HBV顆粒中的M-HBsAg
HBV由衣殼蛋白質(zhì)（HBsAg），HBV核心，HBV DNA組成。HBsAg的基因由PreS1（藍(lán)），PreS2（紅），S（黑）三個(gè)領(lǐng)域組成。S-HBsAgs約一半都被N型糖鏈所修飾，其余不含糖鏈。而M-HBsAg的PreS2結(jié)構(gòu)域被O型糖鏈高度修飾，但L-HBsAg在同一位點(diǎn)卻幾乎不會(huì)被修飾。S-HBsAg存在數(shù)量最多，非傳染性顆粒大部分由S-HBsAg所構(gòu)成。而傳染性HBV顆粒內(nèi)核含有HBV DNA，被由所有類型的HBsAg所形成的衣殼所包裹。HBsAgGi可特異性的識(shí)別在乙肝分型c型M-HbsAg中所*的O型糖鏈修飾PreS2領(lǐng)域。
HBsAgGi與基于S抗體的HBV顆粒識(shí)別
HBV患者的血清中含有的HBV DNA的傳染性顆粒比非傳染性顆粒要多得多。抗S抗體會(huì)對包括非傳染性顆粒在內(nèi)的所有HBV顆粒進(jìn)行識(shí)別，而相比之下，HBsAgGi由于是識(shí)別含有M-HBsAg的傳染性HBV顆粒，因此HBsAgGi檢測不同于S抗體檢測，可更準(zhǔn)確地識(shí)別HBV患者。
在HBV感染患者的血清中，大部分（超過99.9%）的HBV顆粒是亞病毒顆粒（SVP），主要是S-HBs。相比之下，感染性顆粒（DNA 病毒粒子）在整個(gè) HBV顆粒中含量比例不到0.1%。HBsAgGi可以從眾多HBV顆粒中，高效區(qū)分含DNA顆粒的糖肽結(jié)構(gòu)（粉色標(biāo)記）。
HBsAgGi 和其他檢測HBV的標(biāo)志物對比
下表對HBV標(biāo)志物進(jìn)行了對比。qHBsAg和HBV-DNA是傳統(tǒng)標(biāo)志物，而HBcrAg和 HBV-RNA是新型標(biāo)志物。列于表中的是目標(biāo)HBV顆?；蚍肿?。〇代表標(biāo)志物可檢測的顆粒或分子，×代表無法識(shí)別此標(biāo)志物，或不推薦使用。
HBsAgGi 可檢測含有 M-HBsAg 的顆粒，例如 DNA 或 RNA 病毒粒子。
應(yīng)用實(shí)例
使用 HBsAgGi（左）和 PreS2（右）抗體進(jìn)行Western Blot
| ?左: HBsAgGi-gC (RCA-001)，右: anti-PreS2 antibody ?Lane1: S-HBs (CHO) 50 ng ?Lane2: M-HBs (HEK293) 50 ng ?Lane3: L-HBs (yeast) 50 ng ?Lane4: serum (HBV patient) 1 μg ?二抗: HRP-labeled anti-mouse IgG |
HBsAgGi-gC（左）可以檢測出M-HBs但不能檢測L-HBs。而市售的PreS2抗體（右）對L-HBs的識(shí)別能力很強(qiáng)，對M-HBs的識(shí)別能力很弱。在HBV患者的人血清中，HBsAgGi-gC特異性識(shí)別M-HBs，而PreS2抗體識(shí)別M-HBs和L-HBs。
使用HBsAgGi-gC 包被的ELISA板 (RCEK-001) 和重組M-HBsAg 作為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行ELISA法檢測
| ?標(biāo)準(zhǔn)品: M-HBs (3.7 900 ng/mL) ?檢測樣品: HBV患者血清 (2 µL) ?血清 #1: HBsAg 6610 IU/mL, HBV DNA 3.1 ?血清 #2: HBsAg 8612 IU/mL, HBV DNA 0 ?血清 #3: HBsAg 36600 IU/mL, HBV DNA 8.3 ?檢測：生物素化 HBsAgGi-gC 抗體和 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素 |
ELISA板用HBsAgGi-gC包被，用HEK293細(xì)胞中表達(dá)的M-HBs制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。HBV患者的血清(#1-3)經(jīng)稀釋（100 µL中含有2 µL血清）并在同一ELISA板上進(jìn)行測量。HBsAgGi-gC也可以檢測NUC處理后的血清樣本(HBV DNA=0)。
使用 HBsAgGi-gC 進(jìn)行免疫沉淀
| ?原始樣品: HBV 患者血清 (4.1 logIU/20 μL) ?免疫沉淀?xiàng)l件：生物素化 HBsAgGi-gC (RCA-001) 2 μg， ?鏈霉親和素偶聯(lián)磁珠10 μL/1 mL TBS-T, 4°C, 16 hours ?HBV DNA 的定量：通過實(shí)時(shí) PCR 檢測20 μL 沉淀部分 ?(免疫沉淀) 和上清部分 (Sup) 中的 HBV DNA。 |
將HBV顆粒稀釋至1 mL (4.1 logIU/20 μL) 并通過HBsAgGi-gC沉淀。在這種情況下，HBsAgGi-gC可以收集含有HBV DNA的HBV顆粒。
◆HBsAg糖鏈異構(gòu)體檢測用HBsAgGi ELISA試劑盒
本ELISA試劑盒含有可檢測M-HBs的O型糖鏈糖基化修飾PreS2的單抗，可檢測含有DNA的病毒顆粒。
試劑盒規(guī)格
產(chǎn)品編號(hào) | 638-54371 |
對應(yīng)基因分型 | Genotype C |
包裝 | 96 Test |
組成
HBsAgGi 包被96孔板：96 孔 (8孔板×12) | |
M-HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品 (1 mL) | HRP標(biāo)記HBsAgGi (10 mL) |
稀釋液 (24 mL) | TMB底物 (11 mL) |
20X 洗滌液 (50 mL) | 終止液 (12 mL) |
ELISA使用方法
步驟1：HBV DNA顆粒首先被HBsAgGi抗體捕獲。
步驟2：洗滌后，ELISA微孔上捕獲的HBV顆粒將與HRP標(biāo)記的HBsAgGi抗體進(jìn)一步反應(yīng)。
步驟3：進(jìn)一步洗滌后，將HRP底物（TMB底物）加入孔中。孵育后，停止反應(yīng)并測量450nm處的吸光度數(shù)值。
標(biāo)準(zhǔn)曲線
將試劑盒中所包含的標(biāo)準(zhǔn)品 M-HbsAg（800ng/mL）梯度稀釋，調(diào)整為標(biāo)準(zhǔn)M-HBsAg（6.25～400ng/mL）溶液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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使用HBsAgGi ELISA試劑盒進(jìn)行血清中HBsAgGi檢測
檢測樣本：HBV患者3名的血清（1 µL），每個(gè)樣本分別進(jìn)行6次實(shí)驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)M-HBsAgs (6.25 - 400 ng/mL) |
樣品 | qHBsAg (IU/mL) | HBsAgGi (µg/mL) | CV (%) |
血清 #1 | 2100 | 4.5 | 2.52 |
血清 #2 | 8200 | 8.92 | 2.65 |
血清 #3 | 2200 | 11.04 | 1.82 |
※ 本頁面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。
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