靈長類胚胎/誘導多能干細胞培養(yǎng)基

靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞培養(yǎng)基（無飼養(yǎng)層培養(yǎng)）
ReproFF2
特點
●　一周只需處理細胞三次
●　只需常規(guī)培養(yǎng)基用量的一半
●　維持干細胞的未分化狀態(tài)
●　維持干細的分化能力

靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞培養(yǎng)基（無飼養(yǎng)層培養(yǎng)）

ReproFF2 

 

 

◆特點

 

●　一周只需處理細胞三次

●　只需常規(guī)培養(yǎng)基用量的一半

●　維持干細胞的未分化狀態(tài)

●　維持干細的分化能力

注1）由于不含bFGF，請在培養(yǎng)人iPS/ES細胞時添加。

※保存溫度：-20℃

※含有醫(yī)藥用以外的劇毒物0.0008％的2-巰.基乙醇

 

 

◆優(yōu)勢

 

●　反復凍融的細胞依然保持存活。

●　具有長期培養(yǎng)核型穩(wěn)定性。

●　轉移培養(yǎng)基后細胞傳代培養(yǎng)狀態(tài)穩(wěn)定。操作簡便。

●　iPS細胞系菌落完整且免疫染色為陽性

 

 

◆產(chǎn)品概念：周末無需處理

 

 

 

◆無飼養(yǎng)層ReproFF2培養(yǎng)基對干細胞未分化狀態(tài)的維持

 

維持人iPS細胞的未分化狀態(tài)的培養(yǎng)

 

●　使用201B7株人iPS細胞

●　ReproFF2（無飼養(yǎng)層）培養(yǎng)：Passage 10.day 3

●　飼養(yǎng)層培養(yǎng)：Passage 48.day 3

 

 

1.菌落的形態(tài)和堿性磷酸酶活性的確認

 

　　圖為使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細胞有著相似的菌落形態(tài)和堿性磷酸酶活性陽性。

 

　　把細胞移到ReproFF2培養(yǎng)基后，可能會出現(xiàn)細胞狀態(tài)惡化的情況，但繼續(xù)傳代培養(yǎng)的話，狀態(tài)就會穩(wěn)定下來。

 

 

2.未分化標記物的免疫染色結果

 

　　用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細胞相似，都能表達Oct3/4,Nanog,SSEA-1,TRA-1-60。

 

 

 

3.未分化標記物的FACS分析

 

　　用ReproFF2培養(yǎng)基無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細胞顯示了相似的陽性率。

 

 

 

4.長期培養(yǎng)時核型的穩(wěn)定性

 

　　對使用ReproFF2連續(xù)培養(yǎng)到第30代的人iPS細胞的核型進行分析。結果顯示， ReproFF2培養(yǎng)基適合穩(wěn)定長期的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)。

 

 

 

5.人ES細胞的未分化維持培養(yǎng)

 

　　使用KhES-1株人ES細胞

　　使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人ES細胞顯示為堿性磷酸酶染色陽性、Oct3/ 4陽性、未分化性得到良好的維持。

 

 

 

◆使用ReproFF2培養(yǎng)基培養(yǎng)人iPS細胞時，菌落狀態(tài)不好的情況

 

　　ReproFF2雖然是適合培養(yǎng)人ES/iPS細胞的培養(yǎng)基，但是，根據(jù)培養(yǎng)操作等狀況的不同，有時會出現(xiàn)菌落狀態(tài)惡化的情況。

　　如出現(xiàn)以下所述的情況是沒有問題的，請遵從下文指示放心繼續(xù)培養(yǎng)細胞。

 

 

細胞移到ReproFF2培養(yǎng)基后菌落的形態(tài)

 

　　把細胞移到ReproFF2培養(yǎng)基后，可能會出現(xiàn)細胞狀態(tài)惡化的情況（見下左圖）。

　　繼續(xù)進行傳代培養(yǎng)的話，狀態(tài)將會穩(wěn)定下來（見下右圖），請繼續(xù)第4代的傳代培養(yǎng)。

細胞移到ReproFF2培養(yǎng)基的第三天                  傳代培養(yǎng)到第四代的第六天

（狀態(tài)差的菌落）                                               （恢復狀態(tài)的菌落）

 

 

使用ReproFF2培養(yǎng)基傳代后的情況（傳代時菌落太小的情況）

 

　　傳代培養(yǎng)后，下左圖的細胞可能是傳代培養(yǎng)時菌落過小的情況。

　　解決方法：減少移液的次數(shù)或者降低移液管的強度。

  傳代培養(yǎng)時，菌落太小　                           菌落在200-300um中傳代培養(yǎng)

                                                                          （菌落大小恢復正常）

 

 

◆ReproFF2培養(yǎng)基無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細胞的分化能力

 

　　使用ReproFF2培養(yǎng)的人iPS細胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細胞相似，都有向心肌細胞和神經(jīng)細胞分化的能力。

 

 

人iPS細胞向心肌細胞的分化

 

　　把使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細胞向心肌細胞誘導分化，結果得到表達心肌標記物陽性的跳動心肌細胞團。

　　由此得出，使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細胞一樣，擁有向心肌細胞分化的能力。

 

 

※α-MHC, Connexin-43, Cardiac Troponin T: 心肌標記物

 

 

人iPS細胞向神經(jīng)前體細胞、神經(jīng)細胞的分化

 

　　使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細胞向神經(jīng)細胞誘導分化，形成玫瑰花結構（rosette），可以觀察到βIII-tubulin的表達以及TH陽性的神經(jīng)細胞。

　　由此得知，使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細胞一樣，擁有向神經(jīng)細胞分化的能力。

※βIII-tubulin：神經(jīng)纖維的標記物

※rosette：神經(jīng)前體細胞的標記物形態(tài)的特征
※TH (Tyrosine 3-Hydroxyrase)：多巴胺能神經(jīng)元細胞的標記物

 

 

◆相關產(chǎn)品

 

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
RCHEFM001	靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞凍存液	25 mL
RCHETP002	靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞分離液	30 mL
RCHEMD007	靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞培養(yǎng)基（無異源蛋白成分）	500 mL
RCHEMD001	靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞培養(yǎng)基（飼養(yǎng)層培養(yǎng)）	500 mL