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糾結,該如何選購熒光定量PCR

閱讀:2779      發(fā)布時間:2015-8-27
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    熒光定量PCR(qPCR)是以熒光為基礎的定量分析技術,應用非常廣泛,可以用于定量RNA的豐度(RT-qPCR),驗證芯片或測序的數據,確定病原體的載量,進行基因分型等等。
    熒光定量PCR儀負責監(jiān)控反應體系中熒光強度的變化,記錄檢測熒光達到閾值時的循環(huán)數(被稱為Ct或Cq值)。從理論上說,每一個qPCR循環(huán)會使目標序列翻倍,因此人們可以在Ct值的基礎上對樣本進行定量。
    在進行熒光定量PCR時,我們往往會面臨眾多選擇,每一步選擇都影響著實驗的zui終結果。好在市面上的qPCR產品也種類繁多,可以滿足我們的各種需求。
    染料法VS探針法熒光定量PCR主要分為染料法和探針法兩種。染料法一般采用DNA染料SYBR?Green(或Promega的BRYT?Green等),這種方法不僅使用簡單,成本也zui低。不過染料法檢測的是體系中的所有雙鏈DNA,不具有序列特異性。為此,一些廠商提供ROX作為內部熒光參考標準,用來校正背景。
    成本低是染料法qPCR的一個主要優(yōu)勢,DNA染料相對比較便宜,而且適用于任何序列。不過染料法無法在同一個樣本中檢測多個指標,也難以鑒定擴增得到的序列,會受到脫靶效應(如引物二聚體)的影響。在這種情況下,就需要進行熔解曲線分析,判斷擴增所得產物是否只有一種。
熒光定量PCR儀

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