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詳解Tecan多功能酶標儀的檢測原理及其計算

閱讀:3970      發(fā)布時間:2015-9-11
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光是電磁波,波長100nm——400nm稱為紫外光,400nm——780nm之間的光可被人眼觀察到,大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收了光中的紅色光譜。Tecan多功能酶標儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
檢測單位:
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示,OD是optical delnsity(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述關(guān)系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度,Ι0為在檢測物之前的光強度,Ι為從被檢測物出來的光強度。
OD值由下述公式計算:
E=OD=C×D×E
C為檢測物的濃度
D為檢測物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結(jié)果的不準確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進行檢測,稱為測量波長。
但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個參照波長,以消除這個不準確性。在參照波長下,檢測物光的吸收zui小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
Tecan多功能酶標儀檢測值計算
儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進位數(shù)字信號,zui大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中,檢測物的透光值均在0%——100%之間。透光值的計算如下:
T=(Meas-Min)/(Max-Min)
其中T為透光值,Meas為檢測的二進位數(shù)值,Min為在0%的情況下檢測的二進位數(shù)值,Max為在100%的情況下檢測的二進位數(shù)值,舉例如下:
Max=3600 Mn=20 Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552

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