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MALDI-TOF快速準確分析蛋白質(zhì)C-末端氨基酸序列
通過肽質(zhì)量指紋圖譜識別蛋白需要將蛋白酶解后,使用質(zhì)譜來分析酶解產(chǎn)物,然后檢索數(shù)據(jù)庫來確認得到的序列片段。然而,通過檢索數(shù)據(jù)庫來確定N-和C-末端序列卻并不容易。原因在于:1)處理和翻譯后修飾經(jīng)常導致蛋白質(zhì)N-和C-末端結(jié)構(gòu)發(fā)生變化;2)離子抑制效應(yīng)的存在導致部分蛋白序列不可測定。蛋白N-末端氨基酸序列可以使用蛋白測序儀(PPSQ-31A/33A)或者蛋白N-末端測序組件(ORFinder-NBTM)來檢測。然而,對C-末端結(jié)構(gòu)來說,檢測技術(shù)的需求使得蛋白末端氨基酸序列分析變得比以往更為重要。
本文以包含有特征C-末端蛋白的樣品為例,介紹一種全新的、以質(zhì)譜分析氨基酸序列的成功例子。使用LysC酶解蛋白樣品,以TMPP-Ac-OSu對酶解產(chǎn)物進行衍生化修飾,并用DITC樹脂進行分離后,以島津AXIMA Performance檢測確定了蛋白C-末端氨基酸序列。
島津AXIMA Performance
AXIMA PerformanceTM作為島津功能全面的科學研究級MALDI-TOF-TOF儀器,性價比高,是大學,科研單位用戶的機型??梢匀娴拈_展高通量蛋白質(zhì)組學研究,包括多肽,蛋白分子量測定,蛋白鑒定,多肽序列分析,翻譯后修飾研究,如磷酸化,糖基化研究等。高通量自動化蛋白鑒定,高分辨雙離子門,高能CID技術(shù)進行MS/MS,新型曲線場反射器等技術(shù)是該儀器成為蛋白質(zhì)組學研究的有利工具。LMZ(low mass zoom)功能是該儀器的一個優(yōu)勢,可以對低質(zhì)量端的譜圖優(yōu)化,得到的低質(zhì)量端數(shù)據(jù),如亞氨離子的信號得到增強,幫助MS/MS譜圖的準確解析。
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