如何儲(chǔ)存濃縮蛋白質(zhì)，這些技巧需牢記!

如何儲(chǔ)存濃縮蛋白質(zhì)，這些技巧需牢記!

蛋白質(zhì)是非常敏感的，即使已經(jīng)提取濃縮，在儲(chǔ)存時(shí)仍然會(huì)發(fā)生降解、聚合和失活。如下分析幾種保存方法的優(yōu)缺點(diǎn)和一些小技巧，在儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)根據(jù)自己的蛋白和實(shí)驗(yàn)需求選擇適合自己的方法，權(quán)衡利弊，以免造成實(shí)驗(yàn)的麻煩。

1. 儲(chǔ)存在4°C溶液

將濃縮蛋白質(zhì)儲(chǔ)存在單一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。

優(yōu)點(diǎn)：蛋白容易獲得，可以快速進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，且同一管樣品可重復(fù)取樣，這樣避免了因經(jīng)常解凍而加速蛋白的降解。

缺點(diǎn)：在重復(fù)取樣時(shí)，溫度升高且暴露于環(huán)境中，可能會(huì)導(dǎo)致微生物污染，蛋白質(zhì)失活和氧化。要避免這種情況，可以把蛋白質(zhì)分成小份儲(chǔ)存，并加入蛋白酶抑制劑、抗菌劑和還原劑等。但也要根據(jù)自己蛋白的情況，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內(nèi)存在二硫鍵，為保證其完整性，應(yīng)該存儲(chǔ)在氧化環(huán)境中。另外，儲(chǔ)存時(shí)間超過一個(gè)月的蛋白可以考慮扔掉。

2. 儲(chǔ)存在-20°C，加入冷凍保護(hù)劑

可以將蛋白保存在含有25-50% (w/v) 甘油或乙二醇溶液中。

優(yōu)點(diǎn)：在低溫下，蛋白質(zhì)對(duì)微生物污染，蛋白酶降解和氧化反應(yīng)更有抵抗力，容易保證其活性。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中，可以方便取樣。此外，這種方式儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)可以保存長達(dá)一年，對(duì)于抗體軛合物是一個(gè)好的選擇。

缺點(diǎn)： 蛋白質(zhì)在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化，也需加入抑制劑、還原劑等。而且將樣品存放在50%冷凍保護(hù)劑中有時(shí)是不可取的，取決于你接下來要做的實(shí)驗(yàn)。

3. 凍存在-80°C或液氮中

將蛋白質(zhì)分裝成一次使用的量，快速冷凍。

優(yōu)點(diǎn)：可以長期保存（多年)，不需要甘油、*等化學(xué)物質(zhì)，避免蛋白質(zhì)降解或微生物污染。

缺點(diǎn)：冷凍蛋白質(zhì)應(yīng)一次性使用，為了避免反復(fù)凍融發(fā)生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復(fù)合物)冷凍后可能會(huì)失活。

4. 凍干粉末

將你的蛋白質(zhì)脫水凍干成粉末，在冰箱中無限期存放。

優(yōu)點(diǎn)：蛋白質(zhì)不會(huì)像在水溶液中發(fā)生會(huì)水解和其他形式的化學(xué)降解，凍干蛋白質(zhì)的空間也比溶液要小，而且可以長期儲(chǔ)存。

缺點(diǎn)：凍干并不適用于所有蛋白質(zhì)，與細(xì)胞膜相關(guān)的蛋白質(zhì)容易被凍干破壞。而且，并非所有的蛋白質(zhì)都凍干后都能保持穩(wěn)定性，有的可能會(huì)變性，從而減少它們的有用性和再溶解的能力。此外，一些蛋白質(zhì)可能需要與蔗糖、甘露醇或BSA等才能保持穩(wěn)定。

六個(gè)儲(chǔ)存小技巧：

1. 無論是冷凍還是儲(chǔ)存在溶液中，將蛋白進(jìn)行分裝，以避免凍融，降低污染的風(fēng)險(xiǎn)。
2. 低濃度蛋白能更好地與塑料或玻璃結(jié)合，將蛋白濃縮至1mg/ml以上，,或添加BSA等減少這種結(jié)合。
3. 添加乙二醇或甘油等保護(hù)劑，使蛋白穩(wěn)定，防止結(jié)冰。。
4. 抑制微生物的生長，添加硫柳汞01%(w / v)或*0.05%(w / v)。
5. 添加EDTA 、PMSF等蛋白酶抑制劑來減少蛋白質(zhì)降解。
6. 阻止半胱氨酸氧化，可以加入1-5mM還原劑，例如DTT。