為你解說ELISA試劑盒在實驗中的常見問題

為你解說ELISA試劑盒在實驗中的常見問題

1 質控血清的運用
衛(wèi)生部臨床查驗基地制備的乙肝標志物質控血清，能夠在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化運用時，應先混勻，未用完有些可在4℃保留5天。不宜重復冰融或自行分裝。展開某項查驗的室內質控工作需要的質控血清，通常按3-6個月用量預備。自制的不定值質控血清，在一批質控血清將用完之前，需預備下一批質控血清。質控血清請求功能安穩(wěn)，較長期內效價不變，其理化性質應與患者樣本附近，這么才干有效地起到監(jiān)測效果。
2 臨界值質控血清
質操控血清分定值和不決值兩種。如只用一份質控血清定值，通常定在正常值與異常值交界點上，定性測守時處于弱陽性水平，稱為臨界值。乙肝標志物臨界值的擬定，應按臨床請求，為臨床供給一致的判別弱陽性的規(guī)范。
臨界值質控血清能夠作為試劑盒中的陽性對照品和陰性對照品以外的第三個對照品，它能夠活絡地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽性反響的標本不漏檢。
3 質控血清的制備
每個實驗室能夠根據自己的條件，選用臨床基地供給的質控血清，或按以下辦法自己制備本室運用的質控血清（以乙肝質控血清為例）。
1） 搜集新鮮的無溶血、無黃疸、無細菌污染的陽性血清。
2） 56℃加熱10小時來活。
3） 離心或過濾除掉沉淀。
4） 用10%的小牛血清或正常人血清（PBS緩沖液）將搜集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成份更接近于檢測標本。
5） 抽濾除菌。按一次運用的量分裝小安瓿，封口，20℃保留備用。不行重復凍融。
被檢物請求檢出的水平常被認為是質控血清應挑選的水平。如果該實驗還有其它請求，則應加所請求濃度的質控物。
6） 標定含量。20-30次測定成果刪去>±2SD數據的均值作為靶值，并與已知定值血清對比測定。