elisa試劑盒試驗(yàn)原理

elisa試劑盒試驗(yàn)原理

elisa試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大白鼠類風(fēng)濕因子(RF)水平。用純化的大白鼠類
風(fēng)濕因子(RF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中順次加入類風(fēng)濕因子
(RF)，再與 HRP 符號(hào)的類風(fēng)濕因子(RF)抗體結(jié)合，構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹
底洗刷后加底物 TMB 顯。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)，并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成
終究的黃。彩的深淺和樣品中的類風(fēng)濕因子(RF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下
測(cè)定吸光度（OD 值），經(jīng)過(guò)規(guī)范曲線計(jì)算樣品中大白鼠類風(fēng)濕因子(RF)濃度。
elisa試劑盒注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響成果。
3．各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦運(yùn)用排槍加樣。
4． elisa試劑盒請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值
大于規(guī)范品孔孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。