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人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 一晚。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml，4℃一晚。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

1。人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒的測(cè)定應(yīng)進(jìn)行對(duì)EDTA血漿。

2。對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)400毫升EDTA血漿是必需的。

3。在一個(gè)薰衣草[ EDTA管收集全血]。

4。應(yīng)及時(shí)將血漿分離，優(yōu)選地在冷藏的離心機(jī)，并儲(chǔ)存在20°C或更低。

5。EDTA血漿樣品可以存儲(chǔ)長(zhǎng)達(dá)8小時(shí)在2，8°

6。EDTA血漿樣品冷凍在–20°C穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月。

人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒除了非零校準(zhǔn)所有的試劑，試劑盒控制，洗精準(zhǔn)備使用。非標(biāo)準(zhǔn)/校準(zhǔn)器的制備對(duì)于每個(gè)非零校準(zhǔn)（校準(zhǔn)B通過(guò)F）和試劑盒對(duì)照1和2，使每個(gè)用蒸餾水或去離子水混合2毫升小瓶。

讓瓶子站立10分鐘，然后混合*的溫柔的反演，以確保完成重組。使用校準(zhǔn)和控制等盡可能重建。凍結(jié)（20攝氏度）剩余的校準(zhǔn)和控制盡快使用后。校準(zhǔn)和控制在–20°C穩(wěn)定6周后重建與3次凍融建議在程序中處理時(shí)的周期。洗滌濃縮液混洗濃縮物。如果沉淀是由于在洗滌濃縮物低溫貯藏，如4°C，溶解放置在一個(gè)37°C水浴或烤箱的小瓶旋轉(zhuǎn)或攪拌。增加洗滌濃縮液（30毫升）570毫升蒸餾水或去離子水混合。人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒的稀釋液穩(wěn)定90天在室溫下儲(chǔ)存（18－26攝氏度）。儲(chǔ)存/穩(wěn)定性儲(chǔ)存所有的試劑在2，8°C，除了洗滌集中，應(yīng)保持在室溫下直到稀釋，以避免沉淀。

lA140Hu   人尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Plasminogen Activator, Urokinase (uPA)
klA141Hu   人尿激酶型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Plasminogen Activator, Urokinase ReHZptor (uPAR)
klA142Hu   人細(xì)胞間粘附分子5(ICAM5)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for InterHZllular Adhesion Molecule 5 (ICAM5)
klB851Hu   人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子121(VEGF121)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor 121 (VEGF121)
klA144Hu   人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B(VEGFB)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor B (VEGFB)
klA145Hu   人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGFC)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor C (VEGFC)
klA146Hu   人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D(VEGFD)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor D (VEGFD)
klA150Hu   人癌胚抗原(HZA)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Carcinoembryonic Antigen (HZA)
klA151Hu   人激肽釋放酶3(KLK3)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Kallikrein 3 (KLK3)
klA154Hu   人糖抗原125(CA125)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Carbohydrate Antigen 125 (CA125)
klA155Hu   人糖抗原15-3(CA15-3)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Carbohydrate Antigen 15-3 (CA15-3)
klA156Hu   人糖抗原19-9(CA19-9)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Carbohydrate Antigen 19-9 (CA19-9)
klA159Hu   人鱗狀細(xì)胞癌抗原2(SCCA2)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Squamous HZll Carcinoma Antigen 2 (SCCA2)
klA163Hu   人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Tissue Polypeptide Antigen (TPA)
klA165Hu   人胃蛋白酶原A(PGA)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Pepsinogen A (PGA)
klA166Hu   人胃蛋白酶原C(PGC)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Pepsinogen C (PGC)
klA167Hu   人前列腺素E合酶(PTGES)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Prostaglandin E Synthase, Microsomal (PTGES)
klA168Hu   人前列腺酸性磷酸酶(ACP3)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Acid Phosphatase 3, Prostatic (ACP3)
klA174Hu   人髓鞘型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP8)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 8, Myelin (FABP8)