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人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 一晚。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml，4℃一晚。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

1。人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒的測(cè)定應(yīng)進(jìn)行對(duì)EDTA血漿。

2。對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)400毫升EDTA血漿是必需的。

3。在一個(gè)薰衣草[ EDTA管收集全血]。

4。應(yīng)及時(shí)將血漿分離，優(yōu)選地在冷藏的離心機(jī)，并儲(chǔ)存在20°C或更低。

5。EDTA血漿樣品可以存儲(chǔ)長達(dá)8小時(shí)在2，8°

6。EDTA血漿樣品冷凍在–20°C穩(wěn)定長達(dá)4個(gè)月。

人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒除了非零校準(zhǔn)所有的試劑，試劑盒控制，洗精準(zhǔn)備使用。非標(biāo)準(zhǔn)/校準(zhǔn)器的制備對(duì)于每個(gè)非零校準(zhǔn)（校準(zhǔn)B通過F）和試劑盒對(duì)照1和2，使每個(gè)用蒸餾水或去離子水混合2毫升小瓶。

讓瓶子站立10分鐘，然后混合*的溫柔的反演，以確保完成重組。使用校準(zhǔn)和控制等盡可能重建。凍結(jié)（20攝氏度）剩余的校準(zhǔn)和控制盡快使用后。校準(zhǔn)和控制在–20°C穩(wěn)定6周后重建與3次凍融建議在程序中處理時(shí)的周期。洗滌濃縮液混洗濃縮物。如果沉淀是由于在洗滌濃縮物低溫貯藏，如4°C，溶解放置在一個(gè)37°C水浴或烤箱的小瓶旋轉(zhuǎn)或攪拌。增加洗滌濃縮液（30毫升）570毫升蒸餾水或去離子水混合。人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒的稀釋液穩(wěn)定90天在室溫下儲(chǔ)存（18－26攝氏度）。儲(chǔ)存/穩(wěn)定性儲(chǔ)存所有的試劑在2，8°C，除了洗滌集中，應(yīng)保持在室溫下直到稀釋，以避免沉淀。

mily, Member 2 (WNT2)
klL821Hu   人無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員1(WNT1)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 1 (WNT1)
klR030Hu   人序列相似家族5成員C(FAM5C)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Family With SequenHZ Similarity 5, Member C (FAM5C)
klD236Hu   人白三烯A4水解酶(LTA4H)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Leukotriene A4 Hydrolase (LTA4H)
klD295Hu   人細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Cytochrome P450 1A1 (CYP1A1)
klD960Hu   人雌激素受體相關(guān)受體α(ERRα)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Estrogen Related ReHZptor Alpha (ERRa)
klC216Hu   人E1A結(jié)合蛋白P300(EP300)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for E1A Binding Protein P300 (EP300)
klC078Hu   人層黏連蛋白α5(LAMα5)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Laminin Alpha 5 (LAMa5)
klC172Hu   人神經(jīng)調(diào)節(jié)素2(NRG2)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Neuregulin 2 (NRG2)
klD031Hu   人水通道蛋白8(AQP8)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Aquaporin 8 (AQP8)
klF979Hu   人雙特異性磷酸酶9(DUSP9)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Dual Specificity Phosphatase 9 (DUSP9)
klH552Hu   人神經(jīng)源性分化蛋白6(NEUROD6)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Neurogenic Differentiation 6 (NEUROD6)
klC852Hu   人精胺氧化酶(SMOX)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Spermine Oxidase (SMOX)
klN048Hu   人HtrA絲氨酸肽酶4(HTRA4)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)
klE112Hu   人肝配蛋白B2(EFNB2)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Ephrin B2 (EFNB2)
klE490Hu   人溶質(zhì)載體家族30成員8(SLC30A8)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Solute Carrier Family 30 Member 8