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人丙酮酸激酶(PK)ELISA試劑盒實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 一晚。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml，4℃一晚。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

1。人丙酮酸激酶(PK)ELISA試劑盒的測(cè)定應(yīng)進(jìn)行對(duì)EDTA血漿。

2。對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)400毫升EDTA血漿是必需的。

3。在一個(gè)薰衣草[ EDTA管收集全血]。

4。應(yīng)及時(shí)將血漿分離，優(yōu)選地在冷藏的離心機(jī)，并儲(chǔ)存在20°C或更低。

5。EDTA血漿樣品可以存儲(chǔ)長(zhǎng)達(dá)8小時(shí)在2，8°

6。EDTA血漿樣品冷凍在–20°C穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月。

人丙酮酸激酶(PK)ELISA試劑盒除了非零校準(zhǔn)所有的試劑，試劑盒控制，洗精準(zhǔn)備使用。非標(biāo)準(zhǔn)/校準(zhǔn)器的制備對(duì)于每個(gè)非零校準(zhǔn)（校準(zhǔn)B通過F）和試劑盒對(duì)照1和2，使每個(gè)用蒸餾水或去離子水混合2毫升小瓶。

讓瓶子站立10分鐘，然后混合*的溫柔的反演，以確保完成重組。使用校準(zhǔn)和控制等盡可能重建。凍結(jié)（20攝氏度）剩余的校準(zhǔn)和控制盡快使用后。校準(zhǔn)和控制在–20°C穩(wěn)定6周后重建與3次凍融建議在程序中處理時(shí)的周期。洗滌濃縮液混洗濃縮物。如果沉淀是由于在洗滌濃縮物低溫貯藏，如4°C，溶解放置在一個(gè)37°C水浴或烤箱的小瓶旋轉(zhuǎn)或攪拌。增加洗滌濃縮液（30毫升）570毫升蒸餾水或去離子水混合。人丙酮酸激酶(PK)ELISA試劑盒的稀釋液穩(wěn)定90天在室溫下儲(chǔ)存（18－26攝氏度）。儲(chǔ)存/穩(wěn)定性儲(chǔ)存所有的試劑在2，8°C，除了洗滌集中，應(yīng)保持在室溫下直到稀釋，以避免沉淀。

605Ra   大鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Adiponectin (ADP)
klA123Ra   大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGFα)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Transforming Growth Factor Alpha (TGFa)
klA698Ra   大鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF)
klA081Ra   大鼠白介素9(IL9)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Interleukin 9 (IL9)
klA002Ra   大鼠白細(xì)胞激活黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Activated Leukocyte HZll Adhesion Molecule (ALCAM)
klA006Ra   大鼠雙調(diào)蛋白(AREG)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Amphiregulin (AREG)
klA007Ra   大鼠血管生長(zhǎng)素(ANG)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Angiogenin (ANG)
klA008Ra   大鼠血管生成素1(ANGPT1)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Angiopoietin 1 (ANGPT1)
klA009Ra   大鼠血管生成素2(ANGPT2)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Angiopoietin 2 (ANGPT2)
klA112Ra   大鼠β細(xì)胞素(βTC)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for BetaHZllulin (bTC)
klA017Ra   大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE)
klA022Ra   大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(PROCR)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Protein C ReHZptor, Endothelial (PROCR)
klA024Ra   大鼠內(nèi)分泌腺來源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)
klA025Ra   大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF)
klA027Ra   大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Erythropoietin ReHZptor (EPOR)
klA028Ra   大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Erythropoietin (EPO)
klA030Ra   大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS)
klA031Ra   大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL)
klA032Ra   大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF1)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 1, Acidic