XND-42 大孔吸附樹脂提純發(fā)酵液中紫杉醇的研究

  采用 XND-42 型大孔樹脂對紅豆杉產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌發(fā)酵液的粗提液進(jìn)行吸附和洗脫試 驗, 同時應(yīng)用 HPLC 進(jìn)行分析檢測, 確定了工藝條件。 XND-42 型吸附樹脂對紫杉醇 生產(chǎn)廠家；天津市西金納環(huán)保材料科技有限公司；有吸附分離效果。優(yōu)化工藝條件為: 室溫下, 樣品溶于體積分?jǐn)?shù) 50%甲醇- 水溶液, 上柱液體積流量 1 ?5 mL/ min, 體積分?jǐn)?shù) 80%乙醇- 水溶液以體積流量 5 mL/ min 洗脫, 洗脫劑用量為 7 倍量樹脂體積, 回收率達(dá) 90% 。紫杉醇(T axol)是一種經(jīng)次生代謝而產(chǎn)生的四環(huán)二萜酯, 不僅具有強抗癌活性 [ 1] , 而且還具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 [ 2] , 調(diào)節(jié)機體的免疫 [ 3] 等作用。目前紫杉醇主要從紅豆杉的樹皮中提取, 其含量低微且資源緊缺。自從 1993 年 Stierle 與 Stroble [ 4] 報道了從太平洋紫杉樹中分離出一種可產(chǎn)紫杉醇的內(nèi),生真菌( Taxomyces andreanae) 以來, 利用產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)紫杉醇被認(rèn)為是具有廣闊的前景的方法之一, 也將是紫杉醇來源的重要途徑[ 5]。利用內(nèi)生真菌發(fā)酵生產(chǎn)紫杉醇的一個關(guān)鍵步驟是篩選并構(gòu)建高產(chǎn)紫杉醇的菌株。篩選過程往往是先對其進(jìn)行 PDA 培養(yǎng), 然后用有機溶劑提取發(fā)酵物中的紫杉醇, 后用 H PLC 法對提取物進(jìn)行紫杉醇檢測[ 6- 7]。但是由于在發(fā)酵過程中不同種屬的微生物會產(chǎn)生有不同吸收波長的色素、蛋白等雜質(zhì), 致使色譜柱損耗大、 效率低, 也影響液相色譜的精確度, 因此很有必要對紫杉醇提取液進(jìn)行柱前預(yù)處理。生真菌( Taxomyces andreanae) 以來, 利用產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)紫杉醇被認(rèn)為是具有廣闊的前景的方法之一, 也將是紫杉醇來源的重要途徑[ 5]。利用內(nèi)生真菌發(fā)酵生產(chǎn)紫杉醇的一個關(guān)鍵步驟是篩選并構(gòu)建高產(chǎn)紫杉醇的菌株。篩選過程往往是先對其進(jìn)行 PDA 培養(yǎng), 然后用有機溶劑提取發(fā)酵物中的紫杉醇, 最后用 H PLC 法對提取物進(jìn)行紫杉醇檢測[ 6- 7]。但是由于在發(fā)酵過程中不同種屬的微生物會產(chǎn)生有不同吸收波長的色素、蛋白等雜質(zhì), 致使色譜柱損耗大、 效率低, 也影響液相色譜的精確度, 因此很有必要對紫杉醇提取液進(jìn)行柱前預(yù)處理。 天津西金納環(huán)?？萍加邢薰敬罂孜綐渲墙陙硇?發(fā)展起來的一 種有機高分子聚合物吸附劑 [ 8] , 其應(yīng)用日 趨廣泛, 特別是在天然產(chǎn)物的分離純化方面逐漸顯示 出其*性[ 9], 其中 XND-42 型大孔樹脂在純化紫杉醇浸膏中表現(xiàn)出色 [ 10] 。然而, 研究大孔吸附樹脂吸附分離純化發(fā)酵液中紫杉醇很少見。選用 非極性大孔吸附樹脂 XND-42 對發(fā)酵液中的紫杉醇 進(jìn)行分離純化, 優(yōu)化提取工藝參數(shù).