目錄:和元李記(上海)生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)>>支原體檢測與祛除>> AC16L061Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))
CAS | / | 純度 | / |
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分子量 | / | 分子式 | / |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
貨號 | AC16L061 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 用于快速檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。 |
產(chǎn)品描述
Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))是專門用于快速檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。本試劑盒操作簡單,反應(yīng)時間短,只需吸取1 μl細(xì)胞培養(yǎng)上清加入反應(yīng)體系中,60℃孵育1h,肉眼觀察即可判定結(jié)果,與傳統(tǒng)檢測支原體的PCR法優(yōu)勢明顯。本試劑盒檢測范圍廣,可以檢測:(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細(xì)胞的支原體(M.為Mycoplasma的縮寫)。以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種。因此非常適合于與細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的科研實驗室及企業(yè)的日常支原體檢測。【注】:快速法不能檢測尿解,肺支原體。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)) | AC16L061 | 50T | 1350 |
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品組分 | 規(guī)格 |
溶液Ⅰ | 1075 μL (50次檢測) |
溶液Ⅱ | 55 μL(50次檢測) |
溶液Ⅲ | 指示劑,38 μL(50次檢測) |
陽性支原體DNA | 50 μL |
礦物油 | 1500 μL |
【注】:①本試劑盒所指50次測試包含陰性對照、陽性對照,并非50個樣品,因每次測試均需設(shè)置對照,測試樣品數(shù)根據(jù)實驗安排確定,理論上一次最多可測試48個樣品。②使用前用離心機(jī)輕微離心,以免管壁上粘附損失試劑減少檢測次數(shù)。 (注:陽性支原體DNA無需離心。)
運輸與保存
藍(lán)冰運輸。-20℃保存,有效期36個月。
實驗操作流程
1.待測細(xì)胞培養(yǎng)上清收集
為了準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否有支原體的污染,待測的細(xì)胞培養(yǎng)液樣品最好來源于至少培養(yǎng)3 d且匯合度70-90%左右的細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁細(xì)胞)。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也需要在換液傳代后,至少讓細(xì)胞生長3 d再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測,哺乳動物細(xì)胞的存在不會影響檢測結(jié)果。細(xì)胞培養(yǎng)上清可直接用于檢測,但樣品中如果含有EDTA等影響支原體DNA擴(kuò)增的成分,建議進(jìn)行樣品處理,處理過程如下:
樣品處理:(1)根據(jù)濃縮倍數(shù),可以取100-1500μL上述待測樣品到1.5 mL離心管內(nèi),在普通臺式離心機(jī)上1000 rpm低速離心5 min,將離心后的上清轉(zhuǎn)移到另一個離心管內(nèi),丟棄細(xì)胞沉淀。(2)將上清繼續(xù)13000 rpm(約 16000 g)高速離心 5 min,小心吸走全部上清,用 50 μL 5 mM Tris-HCl, pH 8.5(樣品可以長期保存。推薦)或者去離子水重懸沉淀(沉淀中含有支原體),吹吸均勻(如果最初使用了1500 μL 的樣品,則支原體濃度大約提高了30倍)。(3)該重懸后的樣品可以直接檢測,也可以進(jìn)行熱處理后再檢測(熱處理后,樣品保存更穩(wěn)定)。熱處理過程:95 ℃加熱處理 5 min(可以轉(zhuǎn)移到 PCR 管內(nèi),在 PCR 儀上進(jìn)行加熱處理),簡單離心(1000 g,5 sec)后,取上清進(jìn)行檢測。
【注】:收集的待測細(xì)胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測,請放于-20℃或-80℃冰箱保存,不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存1個月,在-80℃可以長期保存。此外,為了節(jié)約檢測成本,可以將不同時間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存,而后一起檢測。
2.反應(yīng)體系的配制
表1:恒溫反應(yīng)體系的配制
組份 | 單個樣品用量(μL) | 樣品總數(shù) | N個樣品用量(μL) |
溶液Ⅰ | 21.5 | N | 21.5×N×1.06 |
溶液Ⅱ | 1 | N | 1×N×1.06 |
溶液Ⅲ | 0.5 | N | 0.5×N×1.06 |
(1)將溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出,室溫放置待其融化,溶液Ⅱ從-20℃冰箱中取出后置于冰上備用。溶液Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000rpm離心30 sec,用移液槍吹洗均勻。三種試劑按表1比例混合。
【舉例】:①如果待測樣品為8個(加上1個陰性和1個陽性對照),則樣品總數(shù)為10個。溶液Ⅰ的總體積為22.5×10×1.06=238.50 μL。溶液Ⅱ的總體積為1×10×1.06=10.60 μL。溶液Ⅲ的總體積為0.5×10×1.06=5.3 μL。將溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ混合均勻即可。②如果打算一個試劑盒一次使用完畢,可以按照以下方法進(jìn)行配制:直接往整管溶液Ⅰ(1150 μL)中加入50 μL 溶液Ⅱ和25 μL溶液Ⅲ,混合均勻即可。如果一次使用完畢,一個試劑盒大概可以檢測48-49個樣品。
【注】:①總體積中多配制6%(如果覺得該比例不合適,可以自己調(diào)整),是為了防止移液誤差,以保證每個反應(yīng)管中的反應(yīng)液足量。②溶液Ⅰ和溶液Ⅲ使用完后,請繼續(xù)放回-20 ℃冰箱中保存。③溶液Ⅱ必須一直在-20 ℃冰箱中保存(溶液Ⅱ在-20 ℃不會凍住),不能放于室溫。④溶液Ⅱ和溶液Ⅲ開蓋之前,請離心一下。
(2)將上述配制好的反應(yīng)體系,吹打均勻后,按每管24 μL分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應(yīng)液體積一樣。PCR管應(yīng)該使用透明度良好的薄壁PCR管。
(3)往測試管(Test)中加入1μL待測細(xì)胞培養(yǎng)液;往陽性對照管(Positive)中加入1 μL陽性支原體DNA;往陰性對照管(Negative)中加入1μL滅菌水;反應(yīng)液的總體積為25 μL。
【注】:①裝有陽性支原體DNA的螺口管開蓋之前,用力甩一下,或者用迷你離心機(jī)即可。
②進(jìn)行反應(yīng)體系配制的房間,與進(jìn)行樣品前處理、加陽性對照DNA、樣品DNA的房間最好分開。
3. 反應(yīng)
PCR儀設(shè)置程序:61℃,60 min;10℃,forever;熱蓋溫度,105℃。
【注】:若實驗室反應(yīng)場所沒有PCR儀,可用水浴鍋代替,水浴鍋顯示溫度與實際溫度的溫差不超過0.5℃,另須往每個反應(yīng)管內(nèi)加入25μL礦物油,以防止水份揮發(fā),然后蓋上蓋子,將反應(yīng)管插入帶孔的漂板內(nèi),放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內(nèi),準(zhǔn)確反應(yīng)60 min。
4. 結(jié)果判斷
61℃反應(yīng)60 min后,立刻取出反應(yīng)管,放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景,通過反應(yīng)管溶液顏色的變化,即可判斷檢測結(jié)果。如果溶液為藍(lán)綠色,則說明有支原體污染;如果為紫紅色,則說明沒有支原體污染(如圖1)。
【注】:如果反應(yīng)60 min,陽性對照效果不明顯,可以繼續(xù)反應(yīng)10 min。
產(chǎn)品圖片
注意事項
1.該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2.必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體,盡量用新購移液器、新開封的槍頭操作。整個操作過程,佩戴kouzhao不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏,移液槍如吸附有,或者人為帶入支原體均有可能造成假陽性。
3.最好使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭,至少應(yīng)該使用新開封的吸頭。
4.檢測過程中,用過的各類吸頭、離心管務(wù)必小心處理,應(yīng)裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶內(nèi)。反應(yīng)后的PCR管,不要開蓋,用過后將其用自封袋密閉,扔到遠(yuǎn)離細(xì)胞房的獨立垃圾桶內(nèi)。
5.如果細(xì)胞被支原體污染,可以選購本公司或其他供應(yīng)商提供的去除試劑盡早去除。
6.如待測樣品是低溫保存的血漿、血清、臍帶血、胰酶、抗生素、未使用的培養(yǎng)液等,這類樣品中支原體含量較低,為了保證支原體DNA的檢出率,可通過離心濃縮提高樣品DNA濃度,再進(jìn)行檢測。
7.如果反應(yīng)后,發(fā)現(xiàn)個別樣品的顏色介于陽性和陰性之間(正常這種情況應(yīng)該概率很低,如果經(jīng)常出現(xiàn),樣品中可能含有可干擾正常指示效果的物質(zhì),必須先去除。),可以將這些樣品繼續(xù) 61℃反應(yīng) 10 min。10 min后,如果其顏色仍然與陽性對照的顏色不同,該樣品應(yīng)該判為陰性。這種可疑樣品建議用相同試劑盒或者不同原理的其他試劑盒(如本公司的《PCR 法支原體檢測試劑盒》貨號:AC16L064、《發(fā)光法支原體檢測試劑盒》貨號:AC16L062 、《探針法支原體檢測試劑盒》貨號:AC16L068)進(jìn)行復(fù)檢。
8.反應(yīng)后,請勿打開反應(yīng)管的蓋子,否則有可能造成檢測環(huán)境的污染。
表2:Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)專用)的優(yōu)勢
比較內(nèi)容 | 檢測支原體PCR法 | Quick Cell 快速支原體檢測試劑盒 |
操作時間 | 3 h | 1 h |
是否需要樣品處理 | 樣品需預(yù)處理,DNA提取 | 無需樣品處理,直接使用上清 |
靈敏度 | 靈敏度低 | 較PCR法提高100-1000倍 |
是否需要電泳 | 需要電泳及染色 | 不需電泳,肉眼觀察結(jié)果 |
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