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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題和解決方法

時(shí)間:2017/5/25閱讀:709
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一、培養(yǎng)ATCC細(xì)胞不貼壁

可能原因: 
胰蛋白酶消化過(guò)度 
支原體污染 
培養(yǎng)基pH值過(guò)堿(NaHCO3分解)               
細(xì)胞老化 
接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 
解決方法: 
縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度 
分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。 
使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2 
啟用新的保種細(xì)胞 
調(diào)節(jié)*接種細(xì)胞濃度

二、懸浮細(xì)胞成簇

可能原因: 
培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子; 
支原體污染; 
蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解; 
DNA污染 
解決方法: 
用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液; 
分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體; 
用DNaseI處理細(xì)胞

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

可能原因:
由于更換不同培養(yǎng)液或血清; 
培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞; 
培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染; 
試劑保存不當(dāng); 
接種ATCC細(xì)胞起始濃度太低; 
細(xì)胞已老化; 
支原體污染 
解決方法: 
比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液; 
換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子;
用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;
血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;
增加接種細(xì)胞起始濃度; 
換用新的保種細(xì)胞; 
分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好

可能原因:
細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;
細(xì)胞的接種量:接種量過(guò)低,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;
細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng);
胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短:時(shí)間過(guò)長(zhǎng),細(xì)胞死亡;時(shí)間過(guò)短,細(xì)胞未*分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速融。
污染
支原體污染
霉菌污染
培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證
選擇的培養(yǎng)基是否合適
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤
培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常
ATCC細(xì)胞培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確

 

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