CIK細(xì)胞

產(chǎn)品屬性：

名稱    CIK細(xì)胞
產(chǎn)品概述

CIK細(xì)胞，即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一種新型的免疫活性細(xì)胞，CIK增殖能力強(qiáng)，細(xì)胞毒作用強(qiáng)，具有一定的免疫特性。

由于該細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子，故又稱為NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性，和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。該細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力很強(qiáng)，

CIK細(xì)胞可以通過多機(jī)制抗腫瘤、抗病毒：

1.CIK細(xì)胞能以不同的機(jī)制識(shí)別腫瘤細(xì)胞，通過直接的細(xì)胞質(zhì)顆粒穿透封閉的腫瘤細(xì)胞膜進(jìn)行胞吐，釋放穿孔素、顆粒酶，實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的裂解；

2.CIK細(xì)胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多種炎性細(xì)胞因子，對腫瘤也有直接抑制作用；

3.CIK細(xì)胞可以通過配體-受體（Fas:FasL）介導(dǎo)的方式誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，因此CIK尤其適用于FasL陽性腫瘤的治療；

4.CIK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子能顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖，有效激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使之趨于正常，提高病人自身抗腫瘤的能力。

目前，腫瘤的發(fā)生機(jī)制尚未形成普遍接受的理論。研究者普遍認(rèn)可腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與人體的免疫功能密切相關(guān)。即在正常情況下，腫瘤與機(jī)體的防御機(jī)能之間處于一種動(dòng)態(tài)的平衡，而一旦這種平衡被破壞，就可能發(fā)生腫瘤。身體各組織細(xì)胞受到外界化學(xué)、物理、生物等因素刺激或自身細(xì)胞衰老變異等因素的影響，使得體內(nèi)某些細(xì)胞發(fā)生突變，成為癌前細(xì)胞；而機(jī)體免疫功能低下或者由于免疫異常，無法及時(shí)識(shí)別、殺傷、清除這些異常細(xì)胞，突變細(xì)胞在組織內(nèi)復(fù)制生長，達(dá)到一定數(shù)量后破壞器官功能，腫瘤即發(fā)生。腫瘤患者，尤其是惡性腫瘤病人往往免疫功能、特別是細(xì)胞免疫功能低下，因而疾病呈進(jìn)展、活動(dòng)、預(yù)后差。因此，提高機(jī)體免疫力，建立有效的免疫應(yīng)答是治療腫瘤有希望的途徑。CIK細(xì)胞治療即將大量殺傷性高、功能強(qiáng)、數(shù)量多的免疫活性細(xì)胞回輸患者體內(nèi)，直接發(fā)揮殺死腫瘤細(xì)胞的作用，并通過調(diào)節(jié)、激活患者的免疫體系，調(diào)動(dòng)、提高患者自身的抗腫瘤能力。

CIK細(xì)胞具有以下突出的特點(diǎn)：

1.增殖速度快，殺瘤活性高。CIK細(xì)胞可以在體外大量擴(kuò)增，培養(yǎng)14天可以增殖200倍以上，其效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+的增殖可達(dá)1000倍以上，抗腫瘤活性得以大大增強(qiáng)。

2.殺瘤譜廣。CIK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷是非MHC限制的，對多種腫瘤細(xì)胞均有殺滅作用。

3.能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡。CIK細(xì)胞雖然在Fas被占據(jù)后會(huì)引起少量細(xì)胞凋亡，但對其殺瘤細(xì)胞毒性沒有明顯影響；反之，CIK細(xì)胞可以誘導(dǎo)FasL陽性腫瘤細(xì)胞的凋亡。

4.對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感。CIK細(xì)胞對放、敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性。

5.CIK細(xì)胞殺瘤活性不受CsA（A）和FK506（普樂可復(fù)）等免疫抑制劑的影響。

6.對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性小，僅對紅系生成產(chǎn)生輕微的抑制，這可能與CIK細(xì)胞自身分泌高水平的IFN-γ有關(guān)。

7.CIK細(xì)胞具有識(shí)別腫瘤的機(jī)制，特異性強(qiáng)，對正常的細(xì)胞無毒性作用。

8.安全性好。CIK細(xì)胞是活化的患者自體細(xì)胞，應(yīng)用安全，不會(huì)產(chǎn)生排斥等反應(yīng)，患者副反應(yīng)小。

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
細(xì)胞骨架銜接蛋白BIN3抗體

Bcr抗體

磷酸化乳腺癌易感基因1抗體(人)

磷酸化T淋巴細(xì)胞受體抗體

B淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體
人γ干擾素(IFN-γ)抗體elisa分析檢測試劑盒

人γ干擾素(IFN-γ)elisa分析檢測試劑盒

人γ分泌素激活蛋白(PION)elisa分析檢測試劑盒

人γ分泌酶elisa分析檢測試劑盒

人γ氨基丁酸(GABA)elisa分析檢測試劑盒
CIK細(xì)胞小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒

小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒

小鼠分化簇抗原30配體(CD30L)elisa檢測試劑盒

小鼠分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)elisa檢測試劑盒

小鼠分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)elisa檢測試劑盒