葡萄糖6磷酸酶（G6P)微量法測試盒

商品介紹：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中，是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。

測定原理：

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，變旋酶和葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NAD+還原生成NADH，在340nm下測定NADH生成速率，即可反映G6P活性。

需自備的儀器和用品：

分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
測定操作表：

酶活性計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 18×A460÷W
（3）按細胞數(shù)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）÷T= 18×A460÷細胞數(shù)量
(4) 按液體體積計算
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 18×A460
ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應中樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，30min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 36×A460÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 36×A460÷W
（3）按細胞數(shù)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
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