丙酮酸脫氫酶（PDH)可見分光光度法測試盒

產(chǎn)品名稱：丙酮酸脫氫酶（PDH)可見分光光度法測試盒
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法: 可見分光光度法
貨號：GOY-01S6573
分類：三羧酸循環(huán)系列
商品介紹：
PDH（EC 4.1.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，催化丙酮酸脫梭生成-TPP，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。

測定原理

PDH催化丙酮酸脫氫，同時還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì)，從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加。

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；
測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體     免疫球蛋白D重鏈保守區(qū)抗體

內(nèi)皮素1抗體     免疫球蛋白A誘導(dǎo)同源蛋白抗體

蝮蛇蛇毒蛋白抗體     免疫球蛋白A Fc段受體1抗體

表皮生長因子受體底物8抗體     蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體

早期生長應(yīng)答蛋白1抗體     泌乳素受體抗體
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酵母蛋白裂解液25ml

酵母蛋白裂解液50ml
丙酮酸脫氫酶（PDH)可見分光光度法測試盒發(fā)根土壤桿菌（發(fā)根植物單胞菌）   紅曲霉菌

蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種Bacillusthuringiensissubsp.galleriae   里氏木霉

杏鮑菇   木耳

遲緩愛德華氏菌   表面培養(yǎng)基60mm/25cm2

陰溝腸桿菌   蒼白芽孢桿菌
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明！