線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ/琥珀酸微量法測試盒

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商品介紹：
線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基FAD還原為FADH2，后者進一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。

測定原理：

復合體Ⅱ的催化產物還原型輔酶Q可進一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計算該酶活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
測定操作表：

劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
酶活性計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpr
（2）按樣本質量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 18×A460÷W
（3）按細胞數量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每104個細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量）÷T= 18×A460÷細胞數量
(4) 按液體體積計算
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 18×A460
ε：氧化型鄰聯茴香胺毫摩爾消光系數：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應中樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 36×A460÷Cpr
（2）按樣本質量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 36×A460÷W
（3）按細胞數量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每104個細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
蛋酸酶抑制劑混合液 11mL

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