谷氨酸脫羧酶（GAD）可見分光光度法測(cè)試盒 返回列表頁

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產(chǎn)品名稱：谷氨酸脫羧酶（GAD）可見分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 50管/24樣
測(cè)試方法: 可見分光光度法
貨號(hào)：GOY-01S6520
分類：氨基酸代謝系列
商品介紹：
谷氨酸脫羧酶是將谷氨酸轉(zhuǎn)化成抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸（GABA）的限速酶，γ-氨基丁酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有效的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，具有降血壓、增進(jìn)腦活力、營養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞、保持神經(jīng)安定、促進(jìn)生長(zhǎng)激素分泌和保肝利腎等作用，目前在醫(yī)藥和保健食品中已有廣泛的應(yīng)用。

測(cè)定原理：

GAD催化谷氨酸產(chǎn)生GABA，利用berthelot反應(yīng)測(cè)定GABA含量，從而測(cè)定GAD活性。

需自備的儀器和用品：

分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
20號(hào)染色體開放閱讀框128抗體     b5抗體

P450ⅡE1抗體     b5還原酶3抗體

CD8/CD8-β抗體     b245輕鏈抗體

細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CABLES2抗體     細(xì)胞球蛋白抗體

B-淋巴細(xì)胞趨化因子抗體     細(xì)胞遷移誘導(dǎo)因子5抗體
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谷氨酸脫羧酶（GAD）可見分光光度法測(cè)試盒即用型封堵液 (Nylon 專用 )50mL  即用型藍(lán)白 T 載體 E 型 ( 無啟動(dòng)子，無 MCS)20 次

硝酸纖維素膜，13×20cm1張  即用型藍(lán)白 T 載體 D 型 ( 無啟動(dòng)子，有 MCS)20 次

硝酸纖維素膜，13×20cm1張  即用型藍(lán)白 T 載體 C 型 (T7-T3，無 MCS)20 次

尼龍膜，13×20cm1張  即用型藍(lán)白 T 載體 B 型 (T7-T3, 有 MCS)20 次

分子雜交爐1臺(tái)  即用型藍(lán)白 T 載體 A 型 (T7-SP6，有 MCS)20 次
FBP活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。