硝酸還原酶(NR)（NADH速率法）微量法測(cè)試盒

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產(chǎn)品名稱：硝酸還原酶(NR)（NADH速率法）微量法測(cè)試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測(cè)試方法: 微量法
貨號(hào)：GOY-01S6477
分類：氮代謝系列
商品介紹：
NR（ EC 1.7.1.3）廣泛存在于植物中，是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶，也是誘導(dǎo)酶，對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。

測(cè)定原理

NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；NADH在 340 nm 有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定NADH減少速率來(lái)表示NR活性。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框25抗體     細(xì)胞周期蛋白SG2N抗體

轉(zhuǎn)錄激活因子MYB抗體     細(xì)胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體

原癌基因cMAF抗體     細(xì)胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框46抗體     細(xì)胞周期蛋白G相關(guān)激酶抗體

8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框70抗體     細(xì)胞周期蛋白3抗體
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硝酸還原酶(NR)（NADH速率法）微量法測(cè)試盒去離子甲酰胺100mL  間充質(zhì)干細(xì)胞脂防細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL

BLOTTO 溶液100mL  間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL

酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL  間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 無(wú)血淸5mL

酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )1.5mL  間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL

Denhardt 溶液，50×100mL  間充質(zhì)干細(xì)胞成骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL
FBP活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。