詳細介紹
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產(chǎn)品質量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
交付內容:純化好的目標蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
核苷酸還原酶M1(RRM1)重組蛋白小鼠 | Mus musculus (Mouse,小鼠) | GOY-01D1585 |
英文名稱:Recombinant Ribonucleotide Reductase M1 (RRM1)
R1; RIR1; RR1; Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit
型號:GOY-01D1585
酶與激酶
物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)
來源:原核表達
宿主E.coli
內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::n/a
預測分子量:-
實際分子量:-(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:N-terminal His Tag
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 97%
等電點:-
應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
以下是相關產(chǎn)品:
雙腎上腺皮質激素樣激酶1(DCLK1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Doublecortin Like Kinase 1 (DCLK1)DCDC3A; DCLK; DCAMKL1; Doublecortin And CaM Kinase-Like 1; Doublecortin domain-containing protein 3A; Doublecortin-like and CAM kinase-like 1物種:Human,人
肝素-2-O-磺基轉移酶1(HS2ST1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Heparan Sulfate-2-O-Sulfotransferase 1 (HS2ST1)酶與激酶物種:Human,人
絲裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶5(MAP4K5)重組蛋白英文名稱:Recombinant Mitogen Activated Protein Kinase Kinase Kinase Kinase 5 (MAP4K5)MAP4-K5; GCKR; KHS; KHS1; MAPKKKK5; Germinal Center Kinase-Related; Kinase homologous to SPS1/STE20物種:Mouse,小鼠
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,轉至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
公司正在出售的產(chǎn)品:
磷酸化Bcl-2抗體 Phospho-Bcl-2 (Thr56) 0.1ml
磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質抗體 phospho-RAD9(Ser277) 0.1ml
CREB結合蛋白抗體 CBP/p300 0.1ml
CD20抗體 CD20 0.1ml
刺激分子B7-1蛋白抗體 CD80/B7-1 0.1ml
趨化素樣因子超家族成員2抗體 CKLFSF2/CMTM2 0.2ml
RAP1GAP酶激活蛋白抗體 RAP1GAP 0.2ml
C-反應蛋白抗體 CRP 0.1ml
脫氫酶抗體 PRODH 0.2ml
艾滋病病毒制約錨定蛋白抗體 ANKHD1 0.2ml
內皮素受體B抗體 EDNRB 0.1ml
附抑制蛋白 Eppin 0.2ml
核苷酸還原酶M1(RRM1)重組蛋白小鼠Apramycin Sulfate 安普1g瓶
One Step RT-PCR Kit50T支
Cycloastragenol 環(huán)黃芪醇84605-18-520mg
1M Tris-HCL(PH7.4)100ml瓶
Tween-80 吐溫-80100ml瓶
6-Shogaol 6-姜烯酚555-66-820mg
NEL樣蛋白2(NELL2)重組蛋白英文名稱:Recombinant NEL Like Protein 2 (NELL2)
nnnnnne L-(蛋)25g瓶
Jatrorrhizine 藥根堿3621-38-320mg
DL-Menthol DL-薄荷醇-89-78-120mg
Wright stain 瑞氏色素5g瓶
Bouin's固定液500ml瓶
進口藍蓋試劑瓶1000ml個