產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號(hào) | GOY-01D3039 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | Eukaryotic Neutrophil Elastase (NE) |
物種 | Mus musculus (Mouse,小鼠) |
上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
—— 銷售熱線 ——
15026555973 |
參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間:2023-03-22 10:03:56瀏覽次數(shù):205
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號(hào) | GOY-01D3039 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | Eukaryotic Neutrophil Elastase (NE) |
物種 | Mus musculus (Mouse,小鼠) |
以下是相關(guān)產(chǎn)品:
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產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號(hào) |
中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)真核蛋白小鼠 | Mus musculus (Mouse,小鼠) | GOY-01D3039 |
英文名稱:Eukaryotic Neutrophil Elastase (NE)
ELANE; HLE; HNE; ELA2; PMN-E; Neutrophil Elastase; Medullasin; Polymorphonuclear Leukocyte Elastase; Bone Marrow Serine Protease; Human Leukocyte Elastase; PMN Elastase
型號(hào):GOY-01D3039
酶與激酶
感染免疫
物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)
來源:真核表達(dá)
宿主293F Cell
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位::細(xì)胞質(zhì), 細(xì)胞外基質(zhì)
預(yù)測(cè)分子量:21.7kDa
實(shí)際分子量:33kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Ser27~Asn265 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 97%
等電點(diǎn):9.6
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達(dá)及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告。可按客戶要求提供含純化標(biāo)簽(Tag)或切除純化標(biāo)簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達(dá)90%以上。
操作步驟:
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個(gè) | 0.5 mL~1 mL |
5×106個(gè) | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺(tái)上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
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