碳酸酐酶Ⅸ(CA9)真核蛋白人

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

Recombinant Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1 (FDFT1)產(chǎn)品名稱：法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1(FDFT1)重組蛋白物種：Rat，大鼠SQS; SS; Squalene Synthase; FPP farnesyltransferase

Recombinant Superoxide Dismutase 2, Mitochondrial (SOD2)產(chǎn)品名稱：線粒體超氧化物歧化酶(SOD2)重組蛋白物種：Human，人IPO-B; MNSOD; Mn-SOD

Recombinant Phospholipid Scramblase 2 (PLSCR2)產(chǎn)品名稱：磷脂爬行酶2(PLSCR2)重組蛋白物種：Mouse，小鼠PL scramblase 2; Ca(2+)-dependent phospholipid scramblase 2

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Eukaryotic Carbonic Anhydrase IX (CA9)

CA-IX; CAIX; MN; pMW1; P54/58N; Carbonic Dehydratase; Renal cell carcinoma-associated antigen G250; RCC-Associated Protein G250; Carbonate dehydratase IX

型號(hào)：GOY-01D3076

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：真核表達(dá)

宿主293F cell

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：細(xì)胞膜, 細(xì)胞核

預(yù)測(cè)分子量：40.4kDa

實(shí)際分子量：44kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Pro59~Asp414 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：PBS, pH7.4, containing 5% Trehalose.

性狀：凍干粉

純度：> 90%

等電點(diǎn)：4.2

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

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