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詳細介紹
商品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 產品分類 | 抗體來源 |
熱休克蛋白104抗體 | 50ul、100ul、200ul | 抗體 / 一抗 | Rabbit |
規(guī)格 50ul 100ul 200ul
產品分類 抗體 / 一抗
英文名稱 ：Hsp104
英文別名 L0948; Heat shock protein 104; HS104_YEAST; Hsp 104.
交叉反應 Human, Mouse
標記 Unconjugated
抗體來源 Rabbit
抗體類型 Polyclonal
免疫原 KLH conjugated synthetic peptide derived from YEAST Hsp104
蛋白細胞定位 細胞核,細胞漿
純化方法 affinity purified by Protein A
亞型 IgG
性狀 Liquid
濃度 1mg/ml
儲存液 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件 Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
背景資料 ：
Hsp104 is a molecular chaperone required for stress tolerance and for maintenance of [psi(+)] prions in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae (1,2). HSP104 is a hexameric protein with two AAA ATPase domains (N- and C-terminal nucleotide-binding domains NBD1 and NBD2, respectively) per monomer (3). NBD1 and NBD2 have very different catalytic properties, but each shows positive cooperativity in hydrolysis (3,4). Point mutations in either of the two nucleotide-binding domains (NBD) of Hsp104 (NBD1 and NBD2) eliminate its thermotolerance function in vivo (5). Hsp104 interacts with Hsp90 cochaperones in respiring yeast (1). The primary function of Hsp104 in prion propagation is to disassemble prion aggregates and generate the small prion seeds that initiate new rounds of prion propagation (possibly assisted by Hsp70-Ssa) (6). |
抗體制備過程：
1.材料與試劑
a．提取的動物 Ig
b．弗氏佐劑和弗氏不佐劑
d．實驗動物 兔
e．其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，殺死實驗活體，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清（無菌采制）
免疫熒光技術的實驗步驟：
一、準備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，十分鐘后棄去，使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內，保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
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抗體分子標記技術：
（一）原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為殘基,殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
（二）準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；
（三）操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；
2.如果氧化反應損傷蛋白質，可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天）；
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；
6.碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
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