詳解原代細胞凍存的步驟

（1）選擇處于對數生長期的原代細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。

（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇，像有些科研君們就用corning胎牛血清,也有人用sigma的小牛血清）

（3）將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記（日期、細胞種類及代次、凍存支數）。

（4）將裝好原代細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐。
短亭山麥冬皂苷C    20mg    供鑒別用    111908-201001
魯斯可皂苷            111909-201001
木通苯乙醇苷B    20mg    含量測定    111910-201001
荷苞花苷    20mg    含量測定    111910-201001
通關藤苷H    10mg    供含量    111913-201001
4-羥基苯乙酸    20mg    供含量測定    111916-201001
女貞苷    10mg    供含量測定    111918-201001
瓜子金皂苷己    20mg    供含量測定    111921-201001
原代細胞