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分享活腫瘤細(xì)胞表面受體配體結(jié)合檢測(cè)的新技術(shù)
閱讀:362 發(fā)布時(shí)間:2017-11-1Tag-lite是SNAP-Tag與HTRF技術(shù)相結(jié)合,用來(lái)進(jìn)行活腫瘤細(xì)胞表面受體分析的一種技術(shù)。
SNAP和CLIP是小的融合標(biāo)簽蛋白,可特異地與底物通過芐甲基不可逆共價(jià)結(jié)合, 其底物分別為芐甲基鳥嘌呤(BG)和芐甲基胞嘧啶(BC)。由于底物可與各種染料形成衍生物,這樣,通過共價(jià)反應(yīng),染料就標(biāo)記到SANP或CLIP上了。
SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白質(zhì)的N端或C端,所以我們可以構(gòu)建SNAP或CLIP與目標(biāo)蛋白的表達(dá)載體。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、融合蛋白表達(dá)后,加入標(biāo)記了熒光染料的底物,我們可以得到標(biāo)記了熒光染料的目標(biāo)蛋白。
在Tag-lite技術(shù)中,用pSNAP或pCLIP與編碼目標(biāo)GPCR的基因構(gòu)建質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,就可表達(dá)N端融合了SNAP或CLIP的目標(biāo)GPCR。
底物(BG或BC)與HTRF熒光染料反應(yīng)形成衍生物,例如與供體(Donor)鋱穴狀化合物(Lumi4®-Tb)形成衍生物,SANP-GPCR或CLIP-GPCR融合蛋白與其反應(yīng),則Tb被標(biāo)記到GPCR上。加入受體(Acceptor)熒光染料標(biāo)記的配體,腫瘤細(xì)胞可以進(jìn)行受體配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,HTRF的能量受體(Acceptor)與底物形成衍生物,則Acceptor被標(biāo)記到GPCR上,可以進(jìn)行GPCR同源二聚化實(shí)驗(yàn)。除此之外,我們還可以進(jìn)行GPCR異源二聚化實(shí)驗(yàn)、寡聚化實(shí)驗(yàn)以及內(nèi)源化實(shí)驗(yàn)等細(xì)胞表面受體分析。
鹽酸氟奮乃靜標(biāo)準(zhǔn)品 146-56-5 125mg Fluphenazine Hydrochloride
鹽酸氟奮乃靜庚酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 3105-68-8 125mg
鹽酸氟西泮標(biāo)準(zhǔn)品 1172-18-5 200mg Flurazepam Hydrochloride CIV
鹽酸氟西汀標(biāo)準(zhǔn)品 56296-78-7 200mg Fluoxetine Hydrochloride
鹽酸格拉司瓊標(biāo)準(zhǔn)品 107007-99-8 150mg Granisetron Hydrochloride
鹽酸胍法辛標(biāo)準(zhǔn)品 29110-48-3 125mg Guanfacine Hydrochloride
鹽酸海克卡因標(biāo)準(zhǔn)品 532-76-3 1g Hexylcaine Hydrochloride
鹽酸環(huán)苯扎林標(biāo)準(zhǔn)品 6202-23-9 200mg Cyclobenzaprine Hydrochloride
鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品 86393-32-0 400mg Ciprofloxacin Hydrochloride
鹽酸環(huán)噴托酯標(biāo)準(zhǔn)品 5870-29-1 300mg Cyclopentolate Hydrochloride
鹽酸黃連素標(biāo)準(zhǔn)品 633-65-8 50mg Berberine Chloride
鹽酸黃酮哌酯標(biāo)準(zhǔn)品 3717-88-2 200mg Flavoxate Hydrochloride
腫瘤細(xì)胞