貓血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

貓血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
【產(chǎn)品名稱】貓血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Mycoplasma haemofelis
【產(chǎn)品編號】YSP6979
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
貓血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
Apigenin載脂蛋白L1檢測試劑盒20mg

6aR,11aR）3-羥基-9，10-二基紫檀 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 3-Hydroxy-9,10-Dimethoxypterocarpan

Rutin鹽金剛標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人載脂蛋白H(APOH)Polyclonal Antibody 0.2ml

ANG II R1(Human angiotension II receptor 1) ELISA Kit  人血管緊張素Ⅱ受體1CAS號：110407半纖維素酶檢測試盒100uHuman/人Elisa試盒3056335

Shikimic acid再生胰島衍生1α/胰石蛋白/胰線蛋白檢測試劑盒20mg

 小鼠骨肉瘤英文名稱：LM-8

Triptolide安西奈德標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)Polyclonal Antibody 0.2ml

ANG4(Human Angiopoietin 4) ELISA Kit  人血管生成素4CAS號：11027637查爾合成酶檢測試盒250gHuman/人Elisa試盒3056335

6羧基四基羅丹明（單一化合物）5mg

甲基小檗堿 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨激酶A2+A3+A4抗體 Pgp ELISA Kit 滲透性糖蛋白(Pgp)ELISA試劑盒

Rabbit Antimouse IgM Whole serum  兔抗小鼠IgM抗血清進(jìn)口、分裝分泌型免疫球蛋白G檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒4857049

6羧基四基羅丹明（單一化合物）5mg

N-基脲(>97%,BR) 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR N-Phenylurea Skirrow瓊脂 規(guī)格： 250g 用途： 用于空腸彎菌的選擇分離培養(yǎng)(GB、ISO)，每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基需添加2支配套試劑。(SR0330)

Rabbit Antimouse IgG1 kappachain Whole serum  兔抗小鼠k鏈抗血清進(jìn)口、原裝分泌型免疫球蛋白E檢測試盒10gHuman/人Elisa試盒4857049

6羧基四基羅丹明（單一化合物）5mg

檸檬 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;0.5mL 淋巴細(xì)胞抗原抗體76抗體 ART4 ELISA Kit ADP核糖轉(zhuǎn)移酶4(ART4)ELISA試劑盒

Rabbit Antimouse IgGFc Whole serum  兔抗小鼠IgGFc抗血清現(xiàn)貨供應(yīng)草酰檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒4858859
貓血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒白花前胡素;Praeruptorin CAS號： 73069257 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

酰次頭堿;Benzoylhypac CAS號： 63238664 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

白樺脂;Betulinic acid CAS號： 472151 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

表告依春;Goitrine Ep CAS號： 1072931 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

;Benzoic acid CAS號： 65850 規(guī)格： 50mg 訂購|咨詢

薄荷腦;DLMenthol CAS號： 1490046 規(guī)格： 100mg 訂購|咨詢

補(bǔ)骨脂素;Corylifolinin CAS號： 20784503 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

酰烏頭原堿;Benzoylaconi CAS號： 466240 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

酰新烏頭原堿;Benzoylmesa CAS號： 63238675 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

白當(dāng)歸腦;Byakangelicol CAS號： 26091792 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

貝母素;Peiminine CAS號： 18059104 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

貝母素;Peimine CAS號： 23496415 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

白當(dāng)歸素;Byakangelicin CAS號： 19573014 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

白果內(nèi);Bilobalide CAS號： 33570046 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

巴豆苷;2Hydroxyadenosi CAS號： 1818719 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢