人支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

實驗過程：
一、人支原體探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2．產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數規(guī)格：
產品名稱：人支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Mycoplasma hominis
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

?
產品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品：
Buddleoside早老素1檢測試劑盒10mg

7,2'-二羥基-3′,4′-二基異黃 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 7,2-Dihydroxy-3,4-Dimethoxyisoflavan

Tripdiolide氨汀標準品規(guī)格：規(guī)格：人晚期糖基化終末產物(AGEs)Polyclonal Antibody 0.2ml

人腫瘤壞死子可溶性受體I(TNFsRI) BPIL2  殺菌/通透性增加蛋白樣2抗體規(guī)格:96T/48TAmiloride Hydrochloride規(guī)格:2gcJun氨基末端激酶檢測試盒500mg人高轉移鼻咽癌細胞系，58F細胞1x10^6cells

Gallic acid早老素2檢測試劑盒20mg

 酵母粉瓊脂/酵母提取物瓊脂/Yeast Extract Agar水中細菌總數的檢測250克國產/進口

Celastrol氨汀二硫化物標準品規(guī)格：規(guī)格：人載脂蛋白C1(APO-C1)Polyclonal Antibody 0.2ml

人基質金屬蛋白酶抑制子4(TIMP4)BPIL3  殺菌/通透性增加蛋白樣3抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:1gClara細胞分泌蛋白檢測試盒20mg人高轉移肺癌細胞，95D細胞1x10^6cells

5羧基四基羅丹明（單一化合物）5mg

反式丁(standard for GC) 質量規(guī)格：standard for GC (E)-2-Butenal

AntiMouse IgA Whole serum  兔抗小鼠IgA抗血清*β防御素2檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒4858859

5羧基四基羅丹明（單一化合物）5mg

 神經束蛋白(NFASC)重組蛋白英文名稱：Recombinant Neurofascin (NFASC)

Rabbit Antirat IgG Whole serum  兔抗大鼠IgG抗血清進口、分裝生物素檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4858859

白頭翁皂甙B45羧基四基羅丹明（單一化合物）10mg

十二(Standard for GC,≥99.5% (GC)) 質量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5% (GC) Dodecane

C.L.E.D Medium250孕烯醇檢測試盒5mg腫瘤壞死子α檢測試盒Interleukin10
人支原體探針法熒光定量PCR試劑盒白藜蘆;Resveratrol CAS號： 501360 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

白楊素;Chrysin CAS號： 480400 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

阿彼斯姆素;apiosylskimmi CAS號： 103529948 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

澳茄新堿;Solasurine CAS號： 27028768 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

7氨4香素;7aMino CAS號： 26093312 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

9氨喜樹堿;9Aminocampt CAS號： 91421431 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

阿馬堿;Raubasine CAS號： 483045 規(guī)格： 100mg 訂購|咨詢

阿奇;Azithromycin CAS號： 83905015 規(guī)格： 100mg 訂購|咨詢

安格洛苷C;Angoroside C CAS號： 115909223 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

安五脂素;Anwuligan CAS號： 107534930 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

阿卡波糖;Acarbose CAS號： 56180940 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

阿多尼弗林堿; CAS號：  規(guī)格： 10mg 訂購|咨詢

D阿拉伯糖;Adonito CAS號： 488813 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

艾黃素;Artemisetin CAS號： 479903 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

β桉葉;βEudesmol CAS號： 51317089 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。