豬滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

豬滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

【產(chǎn)品名稱】豬滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Mycoplasma hyosynoviae
【產(chǎn)品編號】YSP6983
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實(shí)時熒光PCR儀，可通過實(shí)時擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
豬滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
98%1g25g澤瀉醇O63231663matrix metalloproteinase 13

泮托拉唑鈉1.5水合物(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品 PantoprazoleSodium Sesquihydrate

Buddleoside氨苯鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人腸堿性酶(CIAP)Polyclonal Antibody 0.2ml

VPI(Human vasopeptidase inhibitors) ELISA Kit  人血管活性肽酶抑制CAS號：110178 總酚檢測試盒1mgHuman/人Elisa試盒3057747

97%500g100g25脫水澤瀉醇Fmatrix metalloproteinase 12

 大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Shikimic acid氨苯鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)Polyclonal Antibody 0.2ml

CMLC1(Human Cardiac myosinlight chains 1) ELISA Kit  人心肌肌凝蛋白輕鏈1CAS號：110167 生物堿檢測試盒50mgHuman/人Elisa試盒305808199

98%100g25g抗酒石性酶(TRAP)檢測試劑盒(PNP比色法)coagulation factor III

 WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Rabbit AntiMeiiones Unguiculataus MilmeEdwauds Whole serum  兔抗長爪沙鼠IgG抗血清進(jìn)口、分裝腦特異性抗體檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4863916

98%5g1g抗酒石性酶(TRAP)檢測試劑盒(PNP比色法)coagulation factor I

二甲基亞砜(Standard for GC,≥99.95%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.95%(GC) Dimethyl sulfoxide

Donkey Antihuman IgG Whole serum  驢抗人IgG抗血清進(jìn)口、原裝基孔肯尼亞病抗體檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒4863916

95%1g5g性酶(ACP)檢測試劑盒(麝香草酚肽比色法)MG7Antigen

 人結(jié)腸細(xì)胞英文名稱：HCT-15

Eugonic Agar250抗呼吸道合胞病抗體檢測試盒5mg上腺素檢測試盒ThyroidStimulatingHormone
豬滑液支原體探針法熒光定量PCR試劑盒1;4醌（對醌）;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品; CAS號： 106514 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

維生素E;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品(α生育); CAS號： 21590 規(guī)格： 0.5g 訂購|咨詢

雙;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 461585 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

維生素K3;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 58275 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

靛藍(lán);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 482893 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

膽固;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 57885 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

L色氨;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 73223 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

托品;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 529646 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 137406 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

脫醋;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書脫 CAS號： 4418262 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

鳥嘌呤核苷(鳥甙);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證 CAS號： 118003 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

次黃嘌呤核苷(?。?純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有 CAS號： 58639 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

D水蘇糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號： 470553 規(guī)格： 1g 訂購|咨詢

香蘭素;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書;純品 CAS號： 121324 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

低聚果糖套裝(蔗果三糖;蔗果四糖;蔗果五 CAS號： 470699，13133078，59432609 規(guī)格： 20mg*3 訂購|咨詢
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。