牛分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

牛分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。

【產(chǎn)品名稱(chēng)】牛分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
【英文名稱(chēng)】Mycobacterium bovis
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6949
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針?lè)ǎ?duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類(lèi)產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
牛分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
97%500g25g異阿魏2807309Ring Finger Protein 18

柯伊利素-7-O-葡萄糖苷,野決明苷 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品 Chrysoeriol 7-O-glucoside

AstragalosideⅡ沙丁醇相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人垂體腺苷環(huán)化酶激活肽（ PACAP）Polyclonal Antibody 0.2ml

人的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)子受體2(VEGFR2)Fbxw7/CDC4  Fbxw7蛋白抗體規(guī)格:96T/48TAlclometasone Dipropionate規(guī)格:50mgBPDEDNA加合物檢測(cè)試盒20mg人肺癌細(xì)胞(淋結(jié)轉(zhuǎn)移)，NCIH292細(xì)胞1x10^6cells

98%25g100g小連翹次，角茴香107471cyclooxygenase2

 糖-明膠培養(yǎng)基/Lactose-Gelatin Medium產(chǎn)氣莢膜梭菌明膠液化試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

AstragalosideⅢ

Alpha1MG(Human Alpha1microglobulin) ELISA Kit  人α1微球蛋白CAS號(hào)：112629 腐胺檢測(cè)試盒100THuman/人Elisa試盒30374017

草質(zhì)素甙5(6)羧基熒光素（混合物）5mg

5-羥基色鹽鹽,血清鹽鹽 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR Serotonin hydrochloride(5-HT) 透質(zhì)酶(含10mL酶解緩沖液)香菇 Lentinula edodes

  優(yōu)級(jí)胎牛血清進(jìn)口、原裝25羥基膽固醇檢測(cè)試盒25gHuman/人Elisa試盒4792589

異鼠李素3OβD葡萄糖苷5(6)羧基熒光素（混合物）5mg

次野鳶尾黃素;Irisflorentin 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) 小鼠成肌細(xì)胞英文名稱(chēng)：C2C12

  標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清現(xiàn)貨供應(yīng)神經(jīng)型一氧化氮合成酶檢測(cè)試盒5gHuman/人Elisa試盒4792670

5(6)羧基熒光素（混合物）5mg

重樓皂苷I；重樓皂甙I 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 三羥基*基輔酶A合成酶2抗體 PLDN ELISA Kit 蒼白蛋白(PLDN)ELISA試劑盒

Tryptose Broth Base100腸道病71型IgG抗體檢測(cè)試盒5mg盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域受體家族成員2檢測(cè)試盒ImmunoglobulinG
牛分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒環(huán)氧續(xù)隨子; Epoxylathyr CAS號(hào)： 28649607 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

華蟾毒它靈;Cinobufotalin CAS號(hào)： 1108685 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

華蟾毒;Cinobufagin CAS號(hào)： 470371 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

槲皮素3OβD葡糖糖7O CAS號(hào)：  規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

琥珀;Butane diacid CAS號(hào)： 110156 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

胡薄荷;Menthone CAS號(hào)： 89805 規(guī)格： 0.2ml 訂購(gòu)|咨詢(xún)

葫蘆巴堿;Trigonelline CAS號(hào)： 535831 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

紅花八角;Dunnianol CAS號(hào)： 139726297 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

紅松內(nèi);Pinusolide CAS號(hào)： 31685800 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

湖貝堿 ;peimine CAS號(hào)：  規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

黑芥子苷;Sinigrin CAS號(hào)： 3952985 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

黃連堿;Coptisine chlori CAS號(hào)： 3486666 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

環(huán)黃芪;Cycloastragenol CAS號(hào)： 84605185 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

葫蘆素D;Cucurbitacin D CAS號(hào)： 3877869 規(guī)格： 10mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

葫蘆素 E ;cucurbitacin CAS號(hào)： 18444661 規(guī)格： 10mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。