簡(jiǎn)介

細(xì)胞遷移（細(xì)胞從一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置）是正?；虍惓＜?xì)胞生命過程中的一個(gè)關(guān)鍵部分。細(xì)胞遷移在各種生物過程中的重要性促使了開發(fā)用于研究機(jī)制的系統(tǒng)，這些機(jī)制旨在確定能夠促進(jìn)（傷口愈合）或抑制（腫瘤形成）細(xì)胞遷移的治療成分。

本研究著重探討了使用 SpectraMax® MiniMax 300細(xì)胞成像計(jì)數(shù)儀的可行性，這是 SpectraMax® i3 多功能微孔板讀板機(jī)的可選升級(jí)，可使用 Platypus Technologies公司 的 Oris Pro細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)來可視化和分析細(xì)胞遷移。該檢測(cè)利用無毒生物相容性凝膠，該凝膠溶解并在每個(gè)孔的中心形成無細(xì)胞檢測(cè)區(qū)，從而可以研究細(xì)胞進(jìn)入檢測(cè)區(qū)時(shí)所涉及的細(xì)胞遷移機(jī)制。

材料和方法

細(xì)胞培養(yǎng)和檢測(cè)

將 HT1080 細(xì)胞接種到隨 Oris Pro 細(xì)胞遷移檢測(cè)提供的 96 孔（20，000 個(gè)細(xì)胞/孔）或 384 孔（8，000 個(gè)細(xì)胞/孔）Corning 黑色透明底板中。這里使用了 I 型膠原蛋白包被版本（Platypus Technologies 產(chǎn)品目錄 #PROCMACC1）。該檢測(cè)使用無毒生物相容性凝膠在細(xì)胞培養(yǎng)表面上形成無細(xì)胞區(qū)。

接種后，將細(xì)胞置于加濕室（37°C；5% CO2）中約四小時(shí)，以允許細(xì)胞粘附。隨后，將含有測(cè)試化合物 cytochalasin D（一種已知會(huì)破壞細(xì)胞遷移的細(xì)胞滲透性霉菌毒素）或含有 0.1% DMSO 空白對(duì)照的新鮮培養(yǎng)基加入。

48 小時(shí)后，將孔板從培養(yǎng)箱中取出。MiniMax 細(xì)胞成像儀用于采集每個(gè)孔的透射光圖像，以便以后使用 Molecular Devices StainFree 細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行分析。

細(xì)胞按照制造商說明書用 CellTracker綠色 CMFDA 染料（Thermo cat. # C2925）染色，使用 MiniMax 細(xì)胞成像儀的綠色熒光通道采集熒光圖像。采集圖像后，進(jìn)行熒光終點(diǎn)讀取（激發(fā) 472 nm，發(fā)射 526 nm）以確定SpectraMax® i3 讀板機(jī)可用于檢測(cè)細(xì)胞遷移。

優(yōu)勢(shì)

準(zhǔn)確測(cè)量每孔單個(gè)圖像的細(xì)胞遷移

通過寬信號(hào)窗口獲得 StainFree 或熒光圖像分析的靈活性

使用 SoftMax Pro 軟件自動(dòng)分析包含遷移細(xì)胞的感興趣區(qū)域