EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（傣族）；KM9405保存條件

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（傣族）；KM9405保存條件冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細(xì)胞來源于一傣族男性的外周血。1994年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法  1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
培養(yǎng)溫馨提示：
1）公司努力實現(xiàn)為科學(xué)研究提供實驗細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。所提供的實驗細(xì)胞及其子代，不能用于人體實驗和臨床診斷、治療。
2）公司細(xì)胞資源中心承諾盡zui大努力對實驗細(xì)胞資源相關(guān)信息進(jìn)行及時更新。但限于我們的技術(shù)條件，中心不保證其準(zhǔn)確性。
3）從文獻(xiàn)等處引用的信息本中心未進(jìn)行核實，僅供參考。
4）使用者在接收、處理、保存、丟棄、轉(zhuǎn)讓及使用細(xì)胞的時候要遵守國內(nèi)外有關(guān)的法律法規(guī)，充分考慮可能存在的風(fēng)險和責(zé)任，采取適當(dāng)?shù)陌踩吞幚泶胧┍M量降低對健康或環(huán)境的危害。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

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