鮑皰疹樣病毒PCR檢測(cè)試劑盒

鮑皰疹樣病毒PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死癥病毒（IHHNV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?br />對(duì)蝦肝胰腺細(xì)小病毒（HPV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?duì)蝦黃頭病毒（YHV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?duì)蝦桿狀病毒（BP）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?

操作流程:

收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽(yáng)性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測(cè)序——>測(cè)序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫(kù)——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

下列相關(guān)產(chǎn)品：

赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

細(xì)胞腫大病毒屬虹彩病毒（ISKNV/RSIV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

石斑魚(yú)虹彩病毒（GIV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

錦鯉皰疹病毒（KHV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

鯉春病毒血癥病毒（SVCV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。

定量PCR方法：

a、競(jìng)爭(zhēng)法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái)，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。

c、PCR－ELISA法

利用di高辛等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體－辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。

下列是公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：

ASCL2蛋白抗體Anti-ASCL2抗體

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白M1抗體Anti-ARPM1抗體

γ2肌動(dòng)蛋白抗體Anti-ACTG2/Gamma 2 actin抗體

激活素受體2A抗體Anti-ACTR2抗體

激活素受體2B抗體Anti-ACVR2B/ACTR-IIB抗體

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Anti-ABCF2抗體

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白LIM蛋白3抗體Anti-ABLIM3抗體

磷酸化CD156b抗體Anti-phospho-ADAM17 (Thr735)抗體

乙醇脫氫酶5抗體Anti-ADH5抗體

乙醇脫氫酶6抗體Anti-ADH6抗體

遺傳性失明相關(guān)蛋白AIPL1抗體Anti-AIPL1抗體

免疫調(diào)節(jié)蛋白AIRE抗體Anti-PGA1/AIRE抗體

乙醛脫氫酶2型抗體Anti-ALDH1A2抗體

γ-氨基丁酸醛脫氫酶抗體Anti-ALDH9A1抗體

衰老相關(guān)蛋白5抗體Anti-AGPS/Alkyl-DHAP synthase抗體

磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體Anti-phospho-alpha B Crystallin (Ser59)抗體

釉基質(zhì)蛋白抗體Anti-AMBN抗體

磷酸化雄激素受體抗體Anti-phospho-Androgen Receptor (Ser515)抗體

錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激酶ANKK1抗體Anti-ANKK1抗體

膜粘連蛋白11抗體Anti-Annexin A11抗體

諾如病毒GⅠ型、GⅡ型RNA核酸檢測(cè)試劑盒（IAC

MS2過(guò)程控制試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/p>

新型科研S基因核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/p>

新型科研ORF1ab核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/p>

新科研N基因核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/p>

對(duì)蝦桃拉綜合癥病毒（TSV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死癥病毒（IHHNV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦肝胰腺細(xì)小病毒（HPV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦黃頭病毒（YHV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦桿狀病毒（BP）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

羅氏沼蝦諾達(dá)病毒（MrNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦偷死野田村病毒（CMNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

鮑皰疹樣病毒PCR檢測(cè)試劑盒蝦肝腸胞蟲(chóng)（EHP）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

哈維氏弧菌核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

急性肝胰腺壞死?。ˋHPND/EMS）病原核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

對(duì)蝦肝胰腺壞死性細(xì)菌（NHPB）核酸檢測(cè)試劑盒

傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/p>

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。