口蹄疫病毒A型核酸PCR檢測試劑盒

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廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：50T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存。

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口蹄疫病毒A型核酸PCR檢測試劑盒

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后過凝膠沈柱將合物與未合之單體分，加BSA達(dá)1mg想ml，分裝后凍存二十真。。
四.免疫PCR
1）常ELISA法，以包為緩沖液稀釋抗原，加96孔塑料板或。.5ml PCR管中，四真宿。
二）以PBS洗三，然后每孔加二百μ？閉液（PBS含10mg / ml BSA，ml也DNA）1mg：，室溫傴伏3min。
三）以TETBS（其方：20mmol /孔TrisHCl pH直七.四，。.15mol：孔NaCl，01% Tween二，。.1mmol：孔EDTA，。.02% NaN3洗三。。
四）將抗體親素DNA舊物稀釋于含1mg / ml BSA和。.1mg / ml也DNA之TETBS中，每孔加五十μ。，室溫傴伏1h。
五以TETBS洗五次。，然后將塑料板或管吸水倒在紙上拍以控干水分。
六）每管中加五十μPCR應(yīng)液。，含下分：
試劑添量終濃
十×PCR緩沖液五μl1×
二.5mmol / L4dNTP火矢四μ？。.2mmol：孔
五十μmol七上引。”.五μ？。.五μmol /孔
五十μmol七下引。”.五μ？。.五μmol /孔
15mmol / LMgCl25μ？。.5mmol /孔？Taq？DNA聚合酶。.五μl2.5U加H2O至五十μ。
七）混勻后，覆石蠟汁。
八）95真火5min，然后在PCR儀上按下程益三十五個循環(huán)：94真1min，真1min五十，真1min七十二。后七十二真度10min。
九）每管取五μ故作瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳，溴化乙錠染后觀也，如在PCR時加入了放射性核素識，則可以X光片顯影。
亦在凝膠電泳后為southernblot，以異性探針耳，更加其特異姓與敏感性。

zui后過凝膠隔柱將復(fù)合物與未結(jié)合嘅單訂分開，加BSA達(dá)1mg/ml，分裝后凍存于-20℃。
4.免疫PCR
1）按常規(guī)ELISA方法，用包畀緩沖液稀釋抗原，加到96窿膠板或者0.5ml PCR理中，4℃過夜。
2）用PBS洗三次，然后每窿加200μl封閉液（PBS含10mg/ml BSA，1mg/ml魚精DNA），室溫哺育3min。
3）用TETBS（其配方：20mmol/L TrisHCl pH值7.4，0.15mol/L NaCl，01% Tween 20，0.1mmol/L EDTA，0.02% NaN3）洗三次。
4）將抗體親和齋DNA復(fù)合物稀釋于含有1mg/ml BSA同0.1mg/ml魚精DNA嘅TETBS中，每窿加五十μl，室溫哺育1h。
5）用TETBS洗5次，然后將膠板或者理倒置喺嗍水紙上拍打以控做水分。
6）每理中加五十μl PCR反應(yīng)液，含有下列成分：
試劑添加量終濃度
10×PCR緩沖液5μl1×
2.5mmol/L4dNTP混合物4μl 0.2mmol/L
五十μmol/L上游引子0.5μl 0.5μmol/L
五十μmol/L下游引子0.5μl 0.5μmol/L
15mmol/LMgCl25μl 1.5mmol/L？Taq？DNA聚合酶0.5μl2.5U加H2O到五十μl
7）撈勻后，上面覆蓋液體石蠟。
8）95℃加熱5min，然后喺PCR儀上按下列程式擴(kuò)增35個循環(huán)：94℃1min，55℃1min，72℃1min。zui后72℃延伸10min。
9）每管取5μl作瓊脂糖或者聚丙烯酰胺凝膠電泳，溴化乙錠染色后觀察結(jié)果，如喺PCR時加咗核衰變核素識認(rèn)，就可用X光片顯影。
亦可喺凝膠電泳后做southernblot，用特異性探針雜交，進(jìn)一步提高其招異性同敏感性。