鉤端螺旋體ELISA檢測試劑盒 說明書

鉤端螺旋體（Leptospira）試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗法）使用說明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人鉤端螺旋體（Leptospira）的含量。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

[實驗原理]

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人鉤端螺旋體（Leptospira）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人鉤端螺旋體（Leptospira）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

[樣本處理及要求]

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織*碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

[需要而未提供的試劑和器材]

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水或去離子水

[試劑盒組成]

編輯搜圖

健侖生物

編輯搜圖

鉤端螺旋體（Leptospira）簡稱鉤體，種類很多，可分為致病性鉤體及非致病性鉤體兩大類。致病性鉤體能引起人及動物的鉤端螺旋體病，簡稱鉤體病，是在世界各地都廣泛流行的一種人畜共患病，中國絕大多數(shù)地區(qū)都有不同程度的流行，尤以南方各省最為嚴重，對人民健康危害很大，是中國重點防治的傳染病之一。

防治措施

第一，避免犬與帶菌動物(尤其是豬與鼠類)及被其尿所污染的水，飼料接觸。被污染的環(huán)境，可用2～5%漂白粉溶液，或2%氫氧化鈉，或3%來蘇兒消毒。

第二，驅鼠、滅鼠。

第三，嚴禁飼喂病畜肉及帶菌動物的生肉及其他產(chǎn)品。

第四，對較大的犬群每年進行1次檢疫，發(fā)現(xiàn)病犬及可疑感染犬，應及時隔離。青*素、鏈*素對本病有很好的療效，尤其在早期應用，效果更好。但必須連續(xù)治療3～5天，才能起到消除腎臟內(nèi)鉤端螺旋體的作用。

第五，采取藥物預防。我國尚無犬用鉤端螺旋體菌苗，國內(nèi)外有與其他疫苗結合的多聯(lián)苗，可給犬預防接種，但菌苗必須包括當?shù)刂饕餍芯汀Ｈ鐭o菌苗，可在流行期間采用藥物預防，即在飼料中加入土*素(每千克飼料加入土*素0.75～1.5克)或四環(huán)素(按1～1.5毫克/千克體重)，連喂7天，可控制犬的感染。

第六，飼養(yǎng)病犬的人員，不要再與健犬接觸 。

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