基孔肯雅熱病毒IgG抗體檢測試劑盒 (ELISA)

產(chǎn)品名稱：基孔肯雅熱病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：CHIKV IgG ELISA Kit
用途：用于定性或半定量檢測人血清或血漿中的抗基孔肯雅熱病毒IgG抗體。
規(guī)格：96T

一、【前言與簡介】

基孔肯雅熱是一種由伊蚊傳播的病毒性傳染病，其臨床癥狀與登革熱等疾病相似，常給臨床診斷帶來困難?？够卓涎艧岵《綢gG抗體在感染中后期出現(xiàn)，并可長期存在于血液中，表明既往感染。本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），利用純化的基孔 肯雅病毒抗原預(yù)包被微孔板，用于特異性檢測人血清或血漿樣本中的CHIKV IgG抗體。本產(chǎn)品適用于基孔肯雅熱感染的輔助診斷、血清流行病學(xué)調(diào)查和免疫力評估。

二、【檢測原理】

• 本試劑盒采用間接ELISA原理。

• 將純化的基孔 肯雅病毒抗原包被于微孔板孔內(nèi)。

• 將稀釋后的樣本加入微孔中，如果樣本中存在抗CHIKV IgG抗體，則會與孔內(nèi)的抗原特異性結(jié)合。

• 洗板去除未結(jié)合的成分。

• 加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鼠抗人IgG抗體（酶標(biāo)二抗），該抗體會與結(jié)合在抗原上的CHIKV IgG抗體結(jié)合，形成“抗原-抗體-酶標(biāo)二抗"復(fù)合物。

• 再次洗板去除未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。

• 加入底物TMB（四甲基聯(lián) 苯胺）進(jìn)行顯色反應(yīng)?？字薪Y(jié)合的酶催化無色TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物。

• 加入終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

• 用酶標(biāo)儀在450nm波長（參考波長630nm）下測定各孔的吸光度（OD值）。OD值與樣本中CHIKV IgG抗體的含量成正比。
  
  
  

三、【試劑盒組成】

組分 規(guī)格 數(shù)量

預(yù)包被抗原微孔板 12孔×8條 1板

CHIKV IgG陽性對照 1.0mL 1管

CHIKV IgG陰性對照 1.0mL 1管

樣本xi釋液 30mL 1瓶

酶標(biāo)試劑（HRP-抗人IgG） 12mL 1瓶

濃縮洗滌液 (20×) 30mL 1瓶

TMB底物溶液 12mL 1瓶

終止液 12mL 1瓶

封板膜 4張

說明書 1份

四、【儲存條件及有效期】

未開封試劑盒：保存于2-8°C，有效期12個月。

已開封微孔板：應(yīng)將剩余板條放入帶有干燥劑的密封袋中，于2-8°C保存。

其他液體組分：使用后請及時蓋緊瓶蓋，于2-8°C保存。

濃縮洗滌液：如有結(jié)晶，請于37°C水浴至wan全溶解后再進(jìn)行稀釋。

禁止冷凍！

五、【樣本要求】

樣本類型：人血清或血漿（EDTA、肝su鈉或枸櫞suan鈉抗凝）。

樣本處理：樣本應(yīng)清澈透明，無沉淀或懸浮物。避免反復(fù)凍融，高脂血、溶血或污染的樣本可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本稀釋：使用前需用樣本xi釋液按說明書要求進(jìn)行預(yù)稀釋（常見稀釋比例為1:100）。

六、【操作步驟】

準(zhǔn)備工作：將所有試劑和樣本恢復(fù)至室溫（20-25°C），并輕輕搖勻。按需配制好工作濃度洗滌液（將20×濃縮洗滌液按1:19用蒸餾水稀釋）。

設(shè)孔：設(shè)置空白孔1孔（只加樣本xi釋液）、陰性對照2孔、陽性對照2孔、樣本孔若干。

加樣：分別在相應(yīng)孔中加入100μL已稀釋的陰性對照、陽性對照和待測樣本。空白孔加100μL樣本xi釋液。蓋上封板膜，37°C孵育30分鐘。

洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次在吸水紙上拍干。

加酶：除空白孔外，每孔加入100μL酶標(biāo)試劑。蓋上封板膜，37°C孵育30分鐘。

洗滌：重復(fù)步驟4的洗滌過程。

顯色：每孔（包括空白孔）加入100μL TMB底物溶液，37°C避光顯色15分鐘。

終止：每孔加入50μL終止液，輕輕混勻，此時藍(lán)色立即變?yōu)辄S色。

檢測：在加入終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測量各孔的OD值（建議使用630nm作為參考波長進(jìn)行雙波長校正）。

七、【結(jié)果判斷】

有效性判斷：

陰性對照平均OD值應(yīng) < 0.15。

陽性對照平均OD值應(yīng) ≥ 0.8。

空白孔OD值應(yīng) < 0.08。

以上條件需同時滿足，否則實(shí)驗(yàn)無效，需重做。

臨界值（Cut-off）計(jì)算：

Cut-off值 = 陰性對照平均OD值 + 0.15

（注：此計(jì)算公式為常見示例，具體請以實(shí)際試劑盒說明書為準(zhǔn)）

結(jié)果解釋：

陰性 (Negative)：樣本OD值 < Cut-off值。表明樣本中未檢測到CHIKV IgG抗體。

陽性 (Positive)：樣本OD值 ≥ Cut-off值。表明樣本中存在CHIKV IgG抗體，提示既往感染或已產(chǎn)生免疫應(yīng)答。

八、【注意事項(xiàng)】

• 本試劑盒僅用于體外診斷。

• 操作時必須穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套，嚴(yán)格遵守生物安全規(guī)范，所有樣本和試劑均應(yīng)視為有潛在傳染性物質(zhì)進(jìn)行處理。

• 不同批次的試劑組分不得混用，請?jiān)谟行趦?nèi)使用。

• 加樣時請準(zhǔn)確計(jì)時，確保所有孔的反應(yīng)時間一致。

• 顯色反應(yīng)對光敏感，需避光進(jìn)行。

• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀、接觸史及其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果由專業(yè)醫(yī)生進(jìn)行綜合判斷。