基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR)endA1 nupG

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

TOP-10菌株來(lái)源于MC1061菌株， 是目前實(shí)驗(yàn)室常用的感受態(tài)細(xì)胞之一，基因型與DH10B高度類似（DH10B為galE15型，而TOP-10為galU型）。 TOP-10生長(zhǎng)速度快（比DH5α快，但比Mach1-T1生長(zhǎng)速度慢），10小時(shí)可見(jiàn)克隆， recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取?？捎糜跇?gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)。 High5TM系列TOP-10感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg。

操作說(shuō)明：

1. TOP-10感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目 的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無(wú)菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13h。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

 3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。