目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞 非電擊>> S17-1 λpirChemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
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更新時(shí)間：2024-03-21 15:45:47瀏覽次數(shù)：291評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50支100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | ABG028-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
S17-1 λpir Chemically Competent Cell
基因型：
RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1,thiE1, hsdR17, creC510
簡(jiǎn)要說明：
S17-1λpir菌株的染色體中整合了RP4-2質(zhì)粒，該質(zhì)?？梢詳y帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉(zhuǎn)移。S17- 1λpir菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA1)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；同時(shí)為重組酶缺陷型 (recA1)，減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。Tn7賦予該菌株弱的 lian霉素抗性。 S17-1λpir感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×108 cfu/μg DN
操作說明：
1. S17-1λpir感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)（12-15 h）。
注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
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