Stbl2 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thisupE44 relA1 λ-Δ(lac-proAB)

簡要說明：

Stbl2菌株來源于JM109 E.coli strain，適合克隆不穩(wěn)定插入片段（正向重復(fù)序列，逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等）；mcrA突變和mcrBC-hsdRMS-mrr deletion使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列；同時(shí)Stbl2也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。High5TM系列Stbl2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109cfu/μg DNA。

操作說明：

1.Stbl2感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入0.9 mL 室溫 S.O.C. 培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基(推薦使用S.O.C培養(yǎng)基，提高轉(zhuǎn)化效率)。

4.30℃，225 rpm復(fù)蘇90分鐘。（當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化control PUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘。） 

5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.或LB培養(yǎng)基上。 

6.將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。（若轉(zhuǎn)化controlPUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜）。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。 

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

 4.S.O.C.或LB培養(yǎng)基均可使用，S.O.C.可提高轉(zhuǎn)化效率20%；實(shí)驗(yàn)人員可選擇在37℃或30℃培養(yǎng)細(xì)胞，37℃條件下，菌生長速度加快，有利于提高質(zhì)粒產(chǎn)量，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組概率。