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Seahorse XF 細(xì)胞線粒體壓力測試
Seahorse XF 細(xì)胞線粒體壓力測試全面了解線粒體功能
1、實驗背景
安捷倫 SeahorseXF 細(xì)胞線粒體壓力測試通過在 Seahorse XFe 和 XF 細(xì)胞外流量分析儀上直接測量細(xì)胞的氧消耗速率(OCR)來表征線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。它是基于培養(yǎng)板的活細(xì)胞實驗,能夠?qū)崟r監(jiān)測 OCR。
實驗使用 XF 傳感器探針板內(nèi)置的加藥孔在實驗過中將呼吸作用的調(diào)節(jié)劑加入細(xì)胞孔中,從而得到反映線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。實驗試劑盒里的調(diào)節(jié)劑為寡霉素(Oligomycin),羰基氰-4(三氟甲氧基)苯腙(Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy)Phenylhydrazone,F(xiàn)CCP),魚藤酮(Rotenone)。
Seahorse XF 細(xì)胞線粒體壓力測試詞匯表:
基礎(chǔ)呼吸(Basal respiration):用來滿足細(xì)胞ATP需求和線粒體質(zhì)子滲漏的氧消耗。表示細(xì)胞在基礎(chǔ)條件下的能量需求。
ATP產(chǎn)生(ATP Production):加入ATP合酶抑制劑寡霉素后減少的氧氣消耗速率,代表基礎(chǔ)呼吸中被用來驅(qū)動ATP產(chǎn)生的部分。表示用來滿足細(xì)胞能量需求的線粒體ATP產(chǎn)生。
H+(質(zhì)子)滲漏(H+ (Proton) leak):與 ATP產(chǎn)生不偶聯(lián)的基礎(chǔ)呼吸的剩余部分。質(zhì)子滲漏可以被看作是線粒體損傷的標(biāo)志,也可被看作是一種調(diào)節(jié)線粒體ATP產(chǎn)生的機制。
最大呼吸(Maximal respiration):加入解偶聯(lián)劑FCCP之后獲得的最大氧氣消耗速率。FCCP通過刺激呼吸鏈以最大能力運轉(zhuǎn)模擬生理的“能量需求",導(dǎo)致底物(糖,脂肪和氨基酸)的快速氧化以應(yīng)對這一代謝挑戰(zhàn)。顯示細(xì)胞能夠達(dá)到的最大呼吸速率。
備用呼吸能力(Spare respiratory capacity):這個測量指標(biāo)表示細(xì)胞應(yīng)對能量需求的能力以及細(xì)胞呼吸與其理論最大值的差距。細(xì)胞應(yīng)對能量需求的能力可作為細(xì)胞適應(yīng)性或靈活性的一個指標(biāo)。
非線粒體呼吸(Nonmitochondrial respiration):加入魚藤酮后,由于一部分細(xì)胞中的酶繼續(xù)消耗氧而存留的氧消耗。這對于線粒體呼吸的準(zhǔn)確測量很重要。
我公司可提供細(xì)胞能量代謝相關(guān)服務(wù),為您的實驗保駕護(hù)航!
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