上海徠同生物科技有限公司

IP-MS免疫沉淀串聯(lián)質譜分析-蛋白質互作/后修飾原理和應用領域

時間:2022-9-13閱讀:102
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免疫沉淀串聯(lián)質譜分析(IP-MS)原理介紹:

蛋白質相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)和翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)的數(shù)據(jù)是能顯著提高基礎類研究文章檔次的內容。篩選和發(fā)現(xiàn)目的蛋白(target)在細胞中新的互作蛋白或者新的后修飾,免疫沉淀(IP,Immunoprecipitation)結合LC-MS(液相色譜-質譜連用,蛋白質組學研究的核心工具)是目前的主流技術方案(IP-MS)。通過一次IP-MS實驗,能高通量的鑒定和篩選到多個與要研究的目的蛋白(target)存在相互作用的蛋白質(蛋白質復合物組分),從而擁有屬于自己的專屬蛋白質相互作用數(shù)據(jù)庫,通過深入的生物學功能與分子機制的分析,能發(fā)表多篇連續(xù)性的學術文章。

免疫沉淀串聯(lián)質譜分析(IP-MS)應用領域:

免疫沉淀和質譜聯(lián)用(IP-MS),可用來確認抗體與預期靶標的特異性相互作用。在現(xiàn)有的抗體驗證方法中,這種方法的特別之處在于可以主動識別和定量純化自樣本的實際抗體靶標。與其他評估抗體特異性的技術(如,通過對基因敲除小鼠來源樣本進行免疫印跡染色,確定某個消失的條帶)不同,質譜法可以直接確定來源于樣本蛋白的肽段序列。因此,IP-MS是確認抗體與預期靶標直接結合的方法。

免疫沉淀串聯(lián)質譜分析(IP-MS)整體服務方案:

客戶只需提供基因名稱和細胞株即可,我方負責完成后續(xù)所有實驗,包括:

基因克隆與慢病毒制備。

穩(wěn)定細胞株構建與鑒定。

細胞擴增培養(yǎng)。

IP純化蛋白質復合物并SDS-PAGE分離。

切割差異條帶,LC-MS測試分析。

MS數(shù)據(jù)分析,挑選潛在的候選驗證蛋白。

購買抗體,進行IP結合Western blot驗證。


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