徠同生物 - 細(xì)胞周期－流式細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（2025 年最新版）

技術(shù)原理

EdU（5-ethynyl-2' -deoxyuridine），中文全稱為 5 - 乙炔基 - 2' - 脫氧尿苷，是一種新型的胸苷（即胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine）類似物。在細(xì)胞進(jìn)行 DNA 合成的過程中，EdU 能夠憑借其結(jié)構(gòu)特性，替代胸苷摻入到新合成的 DNA 鏈中。

從化學(xué)反應(yīng)層面來看，EdU 分子上的乙炔基具有du特的化學(xué)活性，它能與經(jīng)過熒光標(biāo)記的小分子疊氮化物探針（例如 Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647 等），在一價(jià)銅離子的催化作用下發(fā)生高效的共價(jià)反應(yīng)，進(jìn)而形成穩(wěn)定的三唑環(huán)結(jié)構(gòu)。這一極為迅速的反應(yīng)，被科研領(lǐng)域稱作點(diǎn)擊反應(yīng)（Click reaction）。

通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的 DNA 會(huì)被相應(yīng)的熒光探針特異性地標(biāo)記上。如此一來，科研人員便可以借助合適的熒光檢測(cè)設(shè)備，精準(zhǔn)地檢測(cè)到處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞，從而為細(xì)胞周期和增殖相關(guān)的研究提供有力的技術(shù)支持。

實(shí)驗(yàn)方法du

1. 細(xì)胞培養(yǎng)：精心挑選合適的細(xì)胞系，按照其特定的生長需求，在適宜的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定良好的細(xì)胞基礎(chǔ)。

2. 轉(zhuǎn)染或藥物處理：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作，導(dǎo)入特定的基因片段；或者施加相應(yīng)的藥物處理，以觀察細(xì)胞在不同條件下的反應(yīng)。

3. 加      EDU 試劑：在細(xì)胞處于合適的生長階段時(shí)，向培養(yǎng)體系中加入適量的 EDU 試劑，使其能夠順利摻入到正在合成的 DNA 中。

4. 細(xì)胞收集：待 EDU 摻入達(dá)到預(yù)期時(shí)間后，采用合適的方法收集細(xì)胞，確保細(xì)胞的完整性和活性，為后續(xù)的檢測(cè)做準(zhǔn)備。

5. 上機(jī)檢測(cè)：將收集到的細(xì)胞進(jìn)行必要的處理后，置于流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測(cè)，通過分析熒光信號(hào)來獲取細(xì)胞增殖的相關(guān)數(shù)據(jù)。