2025 年 AD600050 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染 RAW264.7 細(xì)胞質(zhì)粒的全新應(yīng)用

RAW264.7 細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑是一款具有創(chuàng)新性的新型小分子多肽轉(zhuǎn)染試劑，其du特之處在于進(jìn)入細(xì)胞后能夠被代謝，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用，有效避免了細(xì)胞死亡的情況發(fā)生，并且不會(huì)激活細(xì)胞的免疫機(jī)制，為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供了更安全、穩(wěn)定的條件。

一、RAW264.7 細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品詳情

Zeta Life 公司與美國(guó)加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)攜手合作，聯(lián)合開(kāi)發(fā)出了用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞以及活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑。這一先進(jìn)技術(shù)已成為蛋白功能研究、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)與生產(chǎn)等領(lǐng)域的關(guān)鍵核心技術(shù)。

Zeta Life 轉(zhuǎn)染試劑具備強(qiáng)大的轉(zhuǎn)染能力，能夠成功攻克那些極難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞和懸浮細(xì)胞，比如 T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1 細(xì)胞等。同時(shí)，它還可以高效率地將 siRNA 轉(zhuǎn)染到任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，廣泛應(yīng)用于將 DNA 和 siRNA 轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系以及各種原代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中。此外，該轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，可在 10 小時(shí)內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速代謝，是第三代的新型轉(zhuǎn)染試劑，為科研實(shí)驗(yàn)帶來(lái)了極大的便利和優(yōu)勢(shì)。

二、產(chǎn)品說(shuō)明

1. 產(chǎn)品名稱：Advanced DNA RNA Transfection      Reagent

2. 包裝規(guī)格

• 貨號(hào)：AD600025、AD600050、AD600075、AD600150

• 規(guī)格：0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3. 儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，需在 4℃環(huán)境下保存，在該條件下可保存兩年之久。嚴(yán)禁反復(fù)凍融，以免影響試劑的性能和效果。

三、RAW264.7 細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小 6000bp 效果圖和轉(zhuǎn)染操作方法

1. 細(xì)胞接種：提前 1 天進(jìn)行細(xì)胞接種，確保在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度達(dá)到 60%-80% 左右，為轉(zhuǎn)染創(chuàng)造良好的細(xì)胞狀態(tài)。

2. 核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 的比例直接混合，使用移液器反復(fù)吹吸 10-15 次，使兩者充分混勻，然后在室溫下靜止放置 10-15 分鐘，形成穩(wěn)定的核酸復(fù)合物。

3. 加入核酸復(fù)合物到細(xì)胞培養(yǎng)基：根據(jù)參考用量，將制備好的核酸復(fù)合物加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，并輕輕混勻。值得注意的是，細(xì)胞培養(yǎng)基中可以含有血清，這為細(xì)胞提供了更接近生理狀態(tài)的環(huán)境。

4. 細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常的換液操作。但對(duì)于懸浮細(xì)胞而言，在整個(gè)轉(zhuǎn)染過(guò)程中無(wú)需進(jìn)行換液，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作流程。

5. 結(jié)果分析

• 對(duì)于質(zhì)粒       DNA 轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后，通過(guò)熒光檢測(cè)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率；在 48-96 小時(shí)后，檢測(cè) mRNA 或蛋白的表達(dá)情況。如果要進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右，加入適量的藥物進(jìn)行篩選操作。

• 對(duì)于       siRNA 轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)通過(guò)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，在 48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白的表達(dá)情況，從而準(zhǔn)確評(píng)估轉(zhuǎn)染效果。

四、注意事項(xiàng)

1. 質(zhì)粒溶解要求：質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水中，絕對(duì)不能溶解于提取試劑盒所提供的 Buffer。因?yàn)槿芙庥?span> Buffer 中的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會(huì)大幅下降，降幅可達(dá) 80% 左右，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致轉(zhuǎn)染wan全失敗。

2. 內(nèi)毒素去除：質(zhì)粒必須che底去除內(nèi)毒素，內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞具有很強(qiáng)的毒性，會(huì)使轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80% 左右，甚至可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。建議使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 等品牌的去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒進(jìn)行處理，以確保質(zhì)粒的質(zhì)量。

3. 復(fù)合物制備規(guī)范：在復(fù)合物的制備過(guò)程中，嚴(yán)禁使用其他任何試劑對(duì)核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 的比例直接混合即可。如果進(jìn)行了稀釋操作，將會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 混勻與孵育：將轉(zhuǎn)染試劑與核酸充分混勻后，使用移液器吹打 10-15 次，然后在室溫下孵育 10-15 分鐘，之后便可將其加入細(xì)胞培養(yǎng)板中。

5. 換液時(shí)間：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后才能進(jìn)行正常的換液操作，與 Lipo2000 不同，不能在轉(zhuǎn)染 4-6 小時(shí)后就進(jìn)行換液，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。

6. 培養(yǎng)基要求：在對(duì)原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不能含有雙抗培養(yǎng)基，以免對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不良影響，干擾轉(zhuǎn)染過(guò)程。