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細(xì)胞凍存技術(shù)
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)操作,通過(guò)在低溫條件下抑制細(xì)胞的新陳代謝和生長(zhǎng),從而實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期保存細(xì)胞的目的。一般有以下情況時(shí)我們會(huì)采用細(xì)胞凍存技術(shù),例如,
1、細(xì)胞株需要長(zhǎng)期保存;
2、為了規(guī)避污染風(fēng)險(xiǎn),將F0或者F1細(xì)胞進(jìn)行凍存,即使目前傳代的細(xì)胞受到污染都能夠有新鮮細(xì)胞使用;
3、隨著細(xì)胞傳代次數(shù)逐漸增加,細(xì)胞會(huì)發(fā)生突變,為了保證前后實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性,可以使用同樣代次細(xì)胞;
4、細(xì)胞功能和特性研究時(shí),細(xì)胞凍存可以保證細(xì)胞質(zhì)量;
5、為了建立細(xì)胞資源庫(kù),需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行凍存,以方便后續(xù)科研研究;
6、細(xì)胞治療項(xiàng)目中為了保證項(xiàng)目的延續(xù)性,凍存細(xì)胞可以持續(xù)穩(wěn)定的供應(yīng)。
由此可見(jiàn)凍存細(xì)胞非常重要。
實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)凍存細(xì)胞多采用90%胎牛血清和10%DMSO,其次為70%DMEM、20%胎牛血清和10%DMSO。其中胎牛血清含有豐富的蛋白質(zhì)和生長(zhǎng)因子,可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)。它還可以吸附細(xì)胞表面的冰晶,防止細(xì)胞被冰晶損傷。DMSO作為滲透性保護(hù)劑,在梯度降溫過(guò)程中隨著細(xì)胞凝結(jié)逐漸滲透到細(xì)胞內(nèi)部,降低細(xì)胞內(nèi)外溶液中的電解質(zhì)濃度,阻止細(xì)胞內(nèi)水分外滲,避免細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮,減少冰晶的生成。
但是作為占比最大的胎牛血清存在批間差異、成分不明確且價(jià)格昂貴等問(wèn)題,一直以來(lái)都是科研工作者極力想解決的痛點(diǎn)。另一方面DMSO具有毒性,凍存過(guò)程中也會(huì)導(dǎo)致一部分的細(xì)胞提前死亡。所以實(shí)驗(yàn)室工作人員會(huì)選擇多凍存幾支,但是這樣也增加了血清使用量,從而導(dǎo)致整個(gè)凍存過(guò)程成本ji高。
綜上所述使用方法和痛點(diǎn),逐漸出現(xiàn)了無(wú)血清無(wú)DMSO的細(xì)胞凍存液,詳情見(jiàn)“BioProE細(xì)胞凍存液(不含蛋白、DMSO和血清)使用方法"。
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