原代BMDM細胞轉(zhuǎn)染技術分享及5AZA調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境機制研究

研究背景 

5-aza-2'-脫氧胞丁胺（5AZA）作為DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）抑制劑，可激活腫瘤適應性免疫并抑制腫瘤進展，但其調(diào)控腫瘤免疫微環(huán)境的分子機制尚未wan全闡明。本研究聚焦于結(jié)直腸癌（CRC）腹膜癌（PC）免疫微環(huán)境，探討5AZA的作用機制。 

研究方法與結(jié)果 

通過流式細胞術、實時PCR、Western印跡及藥物親和力響應靶標穩(wěn)定性（DARTS）技術，發(fā)現(xiàn)5AZA可誘導巨噬細胞向M1樣表型極化，增強p65磷酸化及IL-6表達，進而激活轉(zhuǎn)移前脂肪組織中的T細胞，抑制免疫功能小鼠模型中的CRC-PC。機制研究表明，ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A9（ABCA9）是5AZA的直接作用靶點，其通過依賴ABCA9的方式誘導膽固醇積累，激活NF-κB通路。藥理學抑制NF-κB或敲除IL-6可消除5AZA的抗腫瘤效應。此外，5AZA與常規(guī)化療藥物（5-Fu或OXP）聯(lián)用可協(xié)同增強抗腫瘤效果。臨床樣本驗證顯示，5AZA可重編程CRC患者基質(zhì)巨噬細胞及T細胞的抗腫瘤免疫功能。 

轉(zhuǎn)染方法總結(jié)（原代BMDM細胞siRNA轉(zhuǎn)染） 

采用ZETA life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑（#AD600150）進行ABCA9 siRNA轉(zhuǎn)染，具體步驟如下： 

1. **細胞接種**：將原代BMDM巨噬細胞以2.5×10? cells/孔密度接種于6孔板，待細胞密度達70%時進行轉(zhuǎn)染。 

2. **轉(zhuǎn)染復合物制備**：室溫下將10 µL siRNA（100 pmol/mL）與10 µL轉(zhuǎn)染試劑混合，孵育15分鐘。 

3. **轉(zhuǎn)染操作**：將復合物加入含1 mL正常DMEM培養(yǎng)基的孔中，孵育24小時后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，后續(xù)收集細胞用于檢測。 

引用產(chǎn)品與技術優(yōu)勢 

**熱門產(chǎn)品**： 

- AD600150：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑（適用于難轉(zhuǎn)染細胞） 

- AV500150：小動物活體轉(zhuǎn)染試劑 

- P400150：Sirius DNA轉(zhuǎn)染試劑 

- 胎牛血清（烏拉圭血源Z7181FBS-500、澳洲血源Z7010FBS-500） 

- 雙抗（BM0001-100）、0.25%胰酶（BM0002-100） 

**ZETA life第三代轉(zhuǎn)染技術優(yōu)勢**： 

1. **低毒性**：多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑可快速代謝，無細胞毒性。 

2. **廣譜適用性**：有效轉(zhuǎn)染免疫細胞（如THP-1、RAW264.7、原代BMDM）、懸浮細胞、干細胞及原代細胞（如肝細胞、子宮內(nèi)膜細胞等）。 

3. **高兼容性**：已成功應用于多種細胞類型（如腫瘤細胞、間充質(zhì)干細胞）的基因沉默與過表達研究，相關成果發(fā)表于 *Theranostics*（IF=12.40，DOI: 10.7150/thno.66420）等高水平期刊。 

 結(jié)論 

本研究shou次揭示5AZA通過ABCA9依賴的膽固醇代謝重編程巨噬細胞，激活T細胞抗腫瘤免疫，為腫瘤免疫治療提供了新靶點。ZETA life轉(zhuǎn)染試劑在原代細胞及難轉(zhuǎn)染細胞中的高效性，為機制研究提供了關鍵技術支撐，推動了腫瘤免疫微環(huán)境領域的深入探索。