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國產(chǎn)電色譜系統(tǒng)可分離蛋白質(zhì)及多肽你知道嗎?

閱讀:601        發(fā)布時間:2019/4/17
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   國產(chǎn)電色譜系統(tǒng)可分離蛋白質(zhì)及多肽你知道嗎?
  國產(chǎn)電色譜系統(tǒng)是一種集毛細(xì)管電泳(HPCE)和液相色譜(HPLC)的分離機(jī)制于一體的方法,它的溶質(zhì)流動是通過一個電驅(qū)動原理,分離機(jī)制是不僅依靠溶質(zhì)—固定相間的反應(yīng)作用,還有電滲流的作用。在普通的毛細(xì)管電色譜模式中,毛細(xì)管填充了化學(xué)改性的硅膠顆粒,固定相如同HPLC中一樣。一個柱塞,置于溶質(zhì)到達(dá)檢測窗口之前的位置,以用于阻止固定相的流失和光信號的失真。塞子和固定相顆粒都可能導(dǎo)致氣泡的產(chǎn)生,從而導(dǎo)致電滲流的中斷,為了大限度地減少氣泡產(chǎn)生的可能性和排除堵塞,這在小直徑的管子內(nèi)是很困難的,因此發(fā)展了一種在毛細(xì)管內(nèi)壁蝕刻的毛細(xì)管電色譜方法,這個過程同在氣相色譜中為了增加毛細(xì)管柱內(nèi)壁表面積而涂上一層聚合物的方法相似,在控制的溫度和反應(yīng)時間下使用了二氟化氫銨作蝕刻劑。較早的研究描述在300-400℃時蝕刻毛細(xì)管3-4小時,這些條件明顯地增加了表面積,從而充分地增大了蛋白質(zhì)、多肽和四環(huán)素與十八烷基固定相間的分配因子(在溶質(zhì)和蝕刻柱內(nèi)壁上的有機(jī)部分之間)。
  用有機(jī)物蝕刻毛細(xì)管的方法是以硅烷化—氫化硅烷化反應(yīng)為基礎(chǔ)的,在這個過程中,毛細(xì)管中被蝕刻過的表面先同三乙氧基甲硅烷反應(yīng),以產(chǎn)生一個氫化物表面,在理想的條件下,一單層三乙氧基甲硅烷被沉淀在柱子表面,以致大部分硅烷醇被氫化物取代,然后通過注入一種含有烯烴的溶劑和一種適合的催化劑,如六氯鉑酸,讓其流過毛細(xì)管,有機(jī)成分就立即被附在氫化物上,這個過程被稱作氫化硅烷化過程,在前面的研究中,被使用的烯烴為1-十八烯烴,硅烷化-氫化硅烷化反應(yīng)方法也被用于毛細(xì)管電泳中未蝕刻的毛細(xì)管柱,以涂附丙烯酰胺聚合物。鍵合方法的一個好處是在有機(jī)部分和表面間形成了一穩(wěn)定的硅—碳鍵合層。實驗證明聚合丙烯酰胺毛細(xì)管通過氫化物間接鍵合比有機(jī)硅烷化更穩(wěn)定,在這個研究中,被蝕刻的毛細(xì)管首先被氫化物介質(zhì)鍵合,隨后和7-辛烯基-1,2-二醇(7-OD)或1-十八烯烴反應(yīng),以產(chǎn)生適合于電色譜的柱子,在HPLC中7-OD鍵合材料已經(jīng)表現(xiàn)出了比二醇基更小的疏水性,以致在用毛細(xì)管電色譜分離混合物產(chǎn)生更適合的特性,在這些混合物中,一個適合的介于疏水性和親水性間的平衡是*的,例如生物分子。
  電色譜過程:二醇基和十八烷基毛細(xì)管柱先進(jìn)行預(yù)處理,由注射泵注入十倍柱體積的緩沖溶劑通過柱子,流動相要先經(jīng)過超聲波脫氣處理,然后用氦氣清潔。電動進(jìn)樣在5KV電壓下,6秒完畢,所有樣品均在211nm下檢測。
  研究結(jié)果表明關(guān)于在化學(xué)改性蝕刻柱上溶質(zhì)—鍵合相作用的研究,它不同于傳統(tǒng)方法,是電色譜的另一種方式,原因在于它以開口管結(jié)構(gòu)代替了填充柱,實驗的結(jié)果表明了鍵合蝕刻柱同空管柱相比具有明顯不同的保留特性,另外,不同的有機(jī)成分涂附在蝕刻過的表面,分離的能力也會不同,如同HPLC中依賴不同的化學(xué)鍵合配位體一樣,這種方式的電色譜的另一些基本特性以及各種各樣化學(xué)改性蝕刻柱制作的進(jìn)一步研究正在取得進(jìn)展。

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