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人黑色素瘤貼壁細胞如何培養(yǎng)
人黑色素瘤貼壁細胞培養(yǎng)方法如下：
1、從手術(shù)室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細剝除腦膜、血管和纖維成分，置Hanks液中漂洗一、二次。
2、置于30—50倍體積的Hanks液中，此時腦組織比較柔軟，反復(fù)吹打即制成細胞懸液。
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細胞或細胞團快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復(fù)二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細胞成分。
4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)成紗布過濾，計數(shù)并調(diào)整細胞密度。
5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。適應(yīng)環(huán)境過程較長，接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見細胞分裂現(xiàn)象，然而一旦生長后即能迅速進入旺盛的增殖狀態(tài)。細胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。
1、從手術(shù)室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細剝除腦膜、血管和纖維成分，置Hanks液中漂洗一、二次。
2、置于30—50倍體積的Hanks液中，此時腦組織比較柔軟，反復(fù)吹打即制成細胞懸液。
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細胞或細胞團快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復(fù)二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細胞成分。
4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)成紗布過濾，計數(shù)并調(diào)整細胞密度。
5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。適應(yīng)環(huán)境過程較長，接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見細胞分裂現(xiàn)象，然而一旦生長后即能迅速進入旺盛的增殖狀態(tài)。細胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。