昆蟲細胞無血清懸浮生長培養(yǎng)基使用方法詳細說明

昆蟲細胞無血清懸浮生長培養(yǎng)基--這種產(chǎn)品是無血清的、完-全懸浮的細胞培養(yǎng)基，適用于各種細胞系，支持高密度細胞生長。它具有兩倍的時間、高活力和與廣泛的細胞類型兼容的特點。當與Bac到Bac昆蟲細胞表達系統(tǒng)結(jié)合使用時，它可以在HiFive和SF9昆蟲細胞中高效和穩(wěn)定地表達多種蛋白質(zhì)。與Bac和SF9細菌桿狀病毒表達系統(tǒng)結(jié)合，可以有效和穩(wěn)定地在HiFivea和SF9害蟲細胞中表達多種蛋白質(zhì)。

艾美捷昆蟲細胞無血清懸浮生長培養(yǎng)基基本參數(shù)：

貨號：A-EXO005

規(guī)格：500mL, 1000mL

保存條件: 4℃避光保存；保質(zhì)期 12 個月。

昆蟲細胞無血清懸浮生長培養(yǎng)基使用方法：

昆蟲懸浮細胞培養(yǎng)環(huán)境

細胞培養(yǎng)條件：溫度曲線：27℃±0.5℃、濕度曲線：70%±20%、無需 CO2、120rpm（振幅：25）。培養(yǎng)過

程中需注意以下三點：

1） 保證搖床 24 小時正常運轉(zhuǎn)；

2） 防止外界環(huán)境溫度過高，導致培養(yǎng)箱內(nèi)溫度失控；

3） 防止培養(yǎng)箱內(nèi)水盤缺水，導致培養(yǎng)箱內(nèi)濕度過低。

培養(yǎng)基適應(yīng)

1. 直接適應(yīng)：最初培養(yǎng)階段，Hi Five 細胞按初始密度 0.5×10

6 cells/mL 接種，SF9 細胞按初始密度 1.0×10

6

cells/mL 接種，直接將培養(yǎng)基更換為昆蟲細胞無血清懸浮生長培養(yǎng)基 (A-EXO005) 進行培養(yǎng)。待細胞培養(yǎng) 2-3

代，且生長穩(wěn)定后進行后續(xù)實驗。Hi Five 細胞穩(wěn)定生長時按 0.5×10⁶cells/mL 密度接種，SF9 細胞穩(wěn)定生長時按 1.0×10⁶cells/mL 密度接種，培養(yǎng) 72h 后均可達到 5-7×10⁶ cells/mL，細胞活率≥90%。

2. 間接適應(yīng)：A-EXO005 培養(yǎng)基與細胞原培養(yǎng)基 1：1 混合培養(yǎng)細胞，連續(xù)傳 2-3 代，細胞穩(wěn)定生長后可將培

養(yǎng)基更換為 A-EXO005 培養(yǎng)基，再傳 2-3 代，細胞生長穩(wěn)定后進行后續(xù)實驗。Hi Five 細胞穩(wěn)定生長時按 0.5×10⁶ cells/mL 密度接種，SF9 細胞穩(wěn)定生長時按 1.0×10⁶cells/mL 密度接種，培養(yǎng) 72h 后均可達到 5-7×10⁶cells/mL，細胞活率≥90%。

3. 注意事項：

3.1. 根據(jù)細胞具體情況選擇進行培養(yǎng)基直接適應(yīng)或者間接適應(yīng)。

3.2 細胞馴化初期，若出現(xiàn)密度低、結(jié)團等不穩(wěn)定狀態(tài)，根據(jù)密度選擇合適的傳代方式。

a. 稀釋傳代：根據(jù)細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，去除多余細胞懸液并補加新鮮培養(yǎng)基。

b. 離心傳代：根據(jù)細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，800rpm（114g）離心 5min，去除上清，用新鮮

培養(yǎng)基重懸細胞。

4. 細胞正常狀態(tài)傳代：

昆蟲懸浮細胞復蘇：

1. 預熱培養(yǎng)基：取 20mL 的對應(yīng)培養(yǎng)基置于 27℃預熱，保證預熱充分。

2. 將凍存管從液氮罐或-80℃冰箱中取出，迅速轉(zhuǎn)移至 37℃水浴中，快速搖晃，直至完-全融化。

3. 取預熱好的培養(yǎng)基 5mL 于無菌離心管中，并將解凍后的細胞懸液移入此離心管中。800rpm 離心 5min（除去凍存液中 DMSO）。

4. 離心后棄去上清，用 15mL 預熱好的培養(yǎng)基（保證較高細胞密度）重懸細胞，移至相應(yīng)搖瓶，放于培養(yǎng)箱中

懸浮培養(yǎng)。

昆蟲懸浮細胞傳代：

1. Hi Five 細胞復蘇初期傳代：

細胞復蘇后前兩代，如果細胞密度＞2×10⁶ cells/mL，取部分細胞懸液離心傳代，按初始密度 0.8×10⁶ cells/mL

接種；如果細胞密度≤2×10⁶ cells/mL，進行全部離心換液（細胞剛復蘇會有細胞碎片，屬正?，F(xiàn)象）。

2. SF9 細胞復蘇初期傳代：

復蘇后 2-3 天取樣計數(shù)，若細胞密度＜2×10⁶cells/mL 以下，細胞不做任何處理，繼續(xù)培養(yǎng) 2-3 天（復蘇后 4-6天），取樣計數(shù)，若細胞密度 2-5×10⁶cells/mL，直接向搖瓶中加入新鮮培養(yǎng)基將細胞密度調(diào)整至 1×10⁶cells/mL左右，切忌不要離心傳代，繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞密度＞5×10⁶cells/mL，可正常稀釋傳代。

3. Hi Five 活細胞初期傳代：

收到細胞后，將細胞轉(zhuǎn)移至搖瓶中，取樣計數(shù)并查看細胞狀態(tài)，如果細胞密度＞2×10⁶ cells/mL，可以稀釋傳代，按 0.8×10⁶ cells/mL 接種；如果細胞密度≤2×10⁶ cells/mL，建議全部離心傳代。（細胞經(jīng)歷運輸過程會有細胞碎片，屬正?，F(xiàn)象）。

4. SF9 活細胞初期傳代：

收到細胞后，將細胞轉(zhuǎn)移至搖瓶中，取樣計數(shù)并查看細胞狀態(tài)，如果細胞密度≥5×10⁶ cells/mL，可以稀釋傳代，按 2×10⁶ cells/mL 接種；如果細胞密度＜5×10⁶ cells/mL，繼續(xù)培養(yǎng) 1-4 天，此期間需每 24h 取樣計數(shù)查看細胞狀態(tài)，當細胞密度≥5×10⁶ cells/mL，按 2×10⁶ cells/mL 接種，稀釋傳代，直至細胞恢復正常狀態(tài)后，按1×10⁶ cells/mL 接種。（細胞經(jīng)歷運輸過程會有細胞碎片，屬正常現(xiàn)象）。

昆蟲懸浮細胞凍存：

1. 待細胞恢復至正常狀態(tài)后，擴大細胞培養(yǎng)體積準備凍存建庫。盡量多建細胞庫，保證備份充足。

2. 含血清凍存：選擇處于對數(shù)生長期、活率＞90%細胞進行凍存，凍存細胞密度：15-20×10⁶ cells/mL，推薦20×10⁶ cells/mL。

無血清凍存：選擇處于對數(shù)生長期、活率＞90%細胞進行凍存，凍存細胞密度：30-40×10⁶ cells/mL，推薦40×10⁶ cells/mL。

3. 準備凍存盒：向程序降溫盒注入適量異丙醇，置于 4℃冰箱預冷。

4. 含血清細胞凍存液配制：凍存液=40%新鮮培養(yǎng)基+50%FBS（建議使用進口胎牛血清）+10%DMSO，凍存液配好后置于 4℃冰箱預冷。

無血清細胞凍存液配制：凍存液=45%新鮮培養(yǎng)基+45%細胞培養(yǎng)上清+10%DMSO，凍存液配好后置于 4℃冰箱預冷。

凍存液配制時，先加培養(yǎng)基再加血清或 DMSO，防止 DMSO 濃度過高導致血清有效成分變性。

5. 取細胞懸液，800rpm 離心 5min，棄去上清，用適量細胞凍存液重懸細胞，調(diào)整細胞密度至目標值。

6. 快速分裝細胞液至凍存管中。

7. 將凍存管放入程序降溫盒中，放于-80℃冰箱，24h 后轉(zhuǎn)至液氮罐中儲存。一段時間后復蘇檢測。

該試劑僅用于科學研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。