EZElisa孕酮ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備&程序分析

孕酮是一種內(nèi)源性類(lèi)固醇和孕激素性激素，參與人類(lèi)和其他物種的月經(jīng)周期、妊娠和胚胎發(fā)育。它屬于一類(lèi)被稱(chēng)為孕激素的類(lèi)固醇激素，并且是體內(nèi)主要的孕激素。孕酮還是合成其他內(nèi)源性類(lèi)固醇（包括性激素和皮質(zhì)類(lèi)固醇）的重要代謝中間產(chǎn)物，并作為神經(jīng)類(lèi)固醇在腦功能中發(fā)揮重要作用。EZElisa™孕酮（Pg）ELISA試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)性抑制酶免疫測(cè)定技術(shù)。試劑盒中的微孔板已經(jīng)預(yù)包被了抗兔抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品加入到適當(dāng)?shù)奈⒖装蹇字?，加入特異性抗孕酮抗體和辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的孕酮。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的孕酮與未標(biāo)記的孕酮通過(guò)與抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)。加入底物溶液到孔中，顏色的發(fā)展與樣品中孕酮的含量相反。停止顏色的發(fā)展，并測(cè)量顏色的強(qiáng)度。

艾美捷EZElisa孕酮ELISA試劑盒基本參數(shù)：

目錄號(hào)：D-AEK0002

規(guī)格：48T/96T

儲(chǔ)存：在4°C下儲(chǔ)存12個(gè)月，避光。

檢測(cè)范圍：0.5 ng/mL-30 ng/mL

靈敏度：0.2 ng/mL

精密度：內(nèi)部精密度：變異系數(shù)（CV）＜15%。間接精密度：變異系數(shù)（CV）＜15%

回收率：回收率范圍為85%至115%，總體平均回收率為100%

特異性：EZElisa™孕酮（Pg）ELISA試劑盒對(duì)孕酮的檢測(cè)具有高靈敏度和優(yōu)異的特異性。未觀察到孕酮與類(lèi)似物之間的顯著交叉反應(yīng)或干擾。

適用樣本：血清、血漿

供應(yīng)材料和儲(chǔ)存條件：

Note: Std1: 0 ng/mL; Std2: 0.5 ng/mL; Std3: 2 ng/mL; Std4: 6 ng/mL; Std5: 15 ng/mL; Std6: 30 ng/mL.

EZElisa孕酮ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備：

注意：使用前將所有試劑平衡至室溫。如果緩沖濃縮液中形成了晶體，請(qǐng)輕輕加熱，直到它們完-全溶解。

1×洗滌緩沖液：將洗滌緩沖液（20×）用去離子水稀釋1:20，得到1×洗滌緩沖液。儲(chǔ)存在4°C。樣品制備

1.血清：使用血清分離管，在室溫下凝固樣品30分鐘，然后以1,000 g的速度離心15分鐘。立即使用血清進(jìn)行檢測(cè)，或?qū)悠贩盅b并儲(chǔ)存于-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

2.血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑采集血漿。在采集后30分鐘內(nèi)以1,000 g的速度離心15分鐘。立即進(jìn)行檢測(cè)，或?qū)悠贩盅b并儲(chǔ)存于-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。注意：不要使用明顯溶血或脂質(zhì)混濁的樣本。如果樣品在24小時(shí)內(nèi)使用，可以儲(chǔ)存在2至8°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。在進(jìn)行檢測(cè)之前，冷凍樣品應(yīng)緩慢回溫至室溫，并輕輕混勻。

程序分析：

1. 從板框中取出多余的微孔板條，放回包含干燥劑包的鋁箔袋中，并重新密封。

2. 每個(gè)孔加入50 μL的孕酮標(biāo)準(zhǔn)品或樣品。建議將所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都復(fù)制加入微孔板中。設(shè)置一個(gè)不加任何溶液的空白孔。

3. 向每個(gè)孔中加入50 μL的HRP偶聯(lián)的孕酮（不加入空白孔），然后按照相同的順序向每個(gè)孔中加入50 μL的孕酮檢測(cè)抗體。充分混勻后，使用提供的板蓋覆蓋孔板，然后在37°C下孵育1小時(shí)。

4. 倒掉每個(gè)孔中的液體并進(jìn)行洗滌，總共重復(fù)三次洗滌過(guò)程。使用多通道移液器或自動(dòng)微孔板洗滌器，將每個(gè)孔填滿1×洗滌緩沖液（250 μL），靜置10秒鐘，每個(gè)步驟完-全去除液體對(duì)于良好的性能至關(guān)重要。在最后一次洗滌后，倒轉(zhuǎn)孔板并在干凈的紙巾上輕拍，去除任何剩余的1×洗滌緩沖液。

5. 向每個(gè)孔中加入50 μL的底物A和50 μL的底物B，充分混勻并使用提供的板蓋覆蓋。在37°C下孵育15分鐘。將孔板放置在黑暗中，遠(yuǎn)離氣流和其他溫度波動(dòng)。

6. 向每個(gè)孔中加入50 μL的停止溶液。停止溶液應(yīng)按照HRP底物的順序加入孔板中?？字械念伾珣?yīng)從藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果孔中的顏色是綠色，或者顏色變化不均勻，請(qǐng)輕輕敲擊孔板以確保充分混勻。

7. 在30分鐘內(nèi)使用設(shè)置為450 nm的微孔板讀數(shù)器測(cè)定每個(gè)孔的吸光度。

注：

1.不要將試劑與其他批次或來(lái)源的試劑混合或替換。

2.為了避免交叉污染，在每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)水平的添加之間和樣品之間更換移液管尖-端添加以及試劑添加之間。此外，每個(gè)試劑使用單獨(dú)的儲(chǔ)液器。

3.為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在培養(yǎng)步驟中需要適當(dāng)粘附板蓋。

4.停止溶液具有一定的腐蝕性。操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。